射频电磁场对仓鼠细胞姐妹染色单体互换的效应

近年来,无极荧光灯的研制取得了很大的进展。为了研究射频电磁场对人体遗传物质的损伤效应,我们用姐妹染色单体互换(SCE)和染色体畸变为指标,观察了各种频率和各种强度的射频电磁场对仓鼠肺细胞DNA的损伤作用。     

肌细胞途径血友病B基因治疗高表达载体的构建及表达研究

构建了以ＭＣＫ（肌肉肌酸激酶）增强子增强、β－ａｃｔｉｎ启动子启动的、反向插入载体Ｇ１Ｎａ的Ｇ１ＮａＰＡＩＸｉ′ＢＡＭ。在与同一系列的、仅内含子元件有差异的载体Ｇ１ＮａＭＢＡＩＸ和Ｇ１ＮａＭＢＡｉＩＸ的体外体内表达比较证明，反向载体是表达最高最稳定的。进一步的二次体内注射研究表明，此载体是国内已报道的最适于肌细胞途径血友病Ｂ基因治疗的反转录病毒载体。     

腺病毒载体中凝血因子IX基因表达的电镜检测

腺病毒载体中凝血因子ＩＸ基因表达的电镜检测王琪卢大儒邱信芳薛京伦颜永碧郑尊（复旦大学遗传学研究所，上海２００４３３）（第二军医大学中心实验室）人凝血因子ＩＸ基因（ＨｕｍａｎＣｏａｇｕｌａｔｉｏｎＦａｃｔｏｒＩＸ，ｈＦＩＸ）缺陷可导致遗传性出血性疾病，...     

内含子对人凝血因子Ⅸ活体表达的增强作用

为了研究内含子在活体水平对凝血因子Ⅸ的表达增强作用，首先采用lacZ为报告基因，建立了阳离子脂质体SA介导的活体基因转移方法。将带有凝血因子Ⅸ（hFⅨ）cDNA的质粒pCMVIX和带有hFⅨcDNA及其内含子的小基因（minigene）的质粒pCMVi'Ⅸ用SA脂质体包裹，分别经尾静脉注射到Balb／c鼠体内，pCMVIX注射后未在血浆中检测到hFⅨ蛋白；而pCMVi'Ⅸ注射后在Balb／c鼠血浆中检测到hFⅨ蛋白，最高达到10．1ng／ml，持续28天。pCMVi'Ⅸ经二次注射，FⅨ表达水平最高达到43.9ng／ml，持续40天后仍可检测到hFⅨ基因的表达，结果表明，内含子在活体水平对凝血因子Ⅸ的表达有显著的增强作用。     

重组腺病毒介导的人凝血Ⅸ因子cDNA在奶山羊乳腺中的分泌表达

利用含ｈＦＩＸｃＤＮＡ和腺病毒片段的质粒ｐＡｄＣＭＶｈＦＩＸ与质粒ｐＪＭ１７共转染２９３包装细胞，制备含ｈＦＩＸ的重组腺病毒颗粒，经纯化、浓缩后通过直接转染活体奶山羊乳腺小叶的方法，建立了ｈＦＩＸ蛋白的乳腺表达系统。转染处理４天后，ｈＦＩＸ蛋白在羊奶中的最高表达量为２１ｎｇ／ｍｌ乳汁，活性检测表明乳汁中的人凝血ＩＸ因子蛋白８０％以上具有生物学活性。此研究结果证实了人凝血ＩＸ因子全长ｃＤＮＡ在奶山羊乳汁中分泌表达的可行性，同时也为验证外源基因在奶山羊乳腺组织中的分泌表达提供了一个快速检测系统。     

腺病毒载体介导的人凝血因子IX基因的离体和活体表达

为血友病Ｂ的基因治疗探索了高效转移和表达载体，建立了重组腺病毒载体介导的基因转移系统（Ａｄｈｆｉｘ），并进行了离体和活体表达研究。结果显示：腺病毒离体基因转移效率可达９８％以上并可在多种细胞中高效表达，ｈＦＩＸ蛋白最高可达６．８６μｇ／１０６细胞／２４ｈｒ。小鼠血浆中ｈＦＩＸ蛋白含量最高可达１０７２ｎｇ／ｍｌ血浆，并可持续表达１０周左右；以腹腔注射效果最好；免疫抑制剂环磷酰胺可明显延长表达持续时间。结果表明重组腺病毒载体可介导ｈＦＩＸｃＤＮＡ在离体细胞和活体组织中高效转移和表达。     

反转录病毒介导的HSV-tk/ACV系统基因治疗的安全性研究

研究了反转录病毒介导的ＨＳＶ－ｔｋ／ＡＣＶ系统基因治疗脑肿瘤的安全性。