L-苯丙氨酸解氨酶产生菌分离及酶促反应研究

从土壤中分离出具有较高活力的苯丙氨酸解氨酶产生菌株——酵母菌SAl。对其酶的诱导合成以及转化肉桂酸生产L-苯丙氨酸条件进行了优化。结果表明，L-苯丙氨酸、L-酪氨酸、L-异亮氨酸作为诱导物及联合使用均能提高L-苯丙氨酸解氨酶的酶活力单位，其中L-酪氨峻的诱导性最好：最佳酶促反应条件为：2．0％反式肉桂酸，碳酸氢铵：氨水（W：V）=4：4，pH10．6，34℃，反应时间8h；往转化体系中添加甘油对酶活力有较好的保护作用。     

奥美拉唑肠溶胶囊体外溶出考察

目的:建立奥美拉唑肠溶胶囊溶出样品检测方法,考察6个不同厂家生产的奥美拉唑肠溶胶囊在5种不同溶出介质中的溶出行为,比较其体外溶出特性,为评价药品质量提供参考。方法:采用桨法,以5种不同溶剂作为溶出介质,转速100 r/min,温度37℃,以高效液相色谱法测定溶出曲线,并进行比较分析。结果:6种奥美拉唑肠溶胶囊在pH1.2、pH4.5的溶出介质中耐酸性较好;在pH6.0、pH6.8、水的溶出介质中国产厂家生产的胶囊与参比制剂的体外溶出不相似。结论:国产的奥美拉唑肠溶胶囊与参比制剂的溶出行为有差异,其质量存在差异,建议提高国产奥美拉唑肠溶胶囊的质量。     

HPLC法测定东革阿里中宽缨酮的含量

目的:测定东革阿里中宽缨酮含量。方法:采用Waters Sunfire C18(4.6×250mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.1%甲酸为流动相梯度洗脱,流速1.0mL/min,检测波长:238nm,柱温40℃。结果:宽缨酮在线性范围1.272～101.72μg·mL-1(r=0.9998)内具有良好的线性关系,平均回收率分别为98.87%(n=9),日内精密度RSD为0.46%。结论:本法操作简便,结果稳定,重现性好,可作为东革阿里中宽缨酮的质量控制方法。     

聚乙烯醇复合凝胶固定化黑曲霉细胞研究

以聚乙烯醇(PVA)复合凝胶为载体,利用冻融法固定产α葡萄糖转苷酶的黑曲霉M1菌丝。由于PVA冻胶的多孔性,高分子底物可以穿透载体与细胞酶直接反应。细胞经过固定化后,机械性能和化学稳定性都得到提高,可以重复多次对甲基αD葡萄糖苷进行水解反应。同时对该自由细胞和固定化细胞进行酶学特性研究。发现2者的最适pH值同为pH6.0,最适反应温度分别为55℃、60℃。固定化细胞的Vm值为2.84μmol/(L·min·g),大于自由细胞的Vm1.71μmol/[L·(min·g)],固定化细胞的Km(11.88mmol/L)小于自由细胞的Km(20.50mmol/L)。细胞经固定化,提高了细胞酶的操作、温度和贮藏稳定性。     

HPLC法测定不同溶出介质中的阿莫西林胶囊溶出曲线

目的:建立测定阿莫西林胶囊在不同溶出介质中溶出曲线的方法。方法:采用HPLC法,色谱柱为Inertsil ODS-SP,5μm,4.6*250mm;流动相0.1361%醋酸钠溶液(用醋酸调节pH为4.5)-甲醇(947:53);检测波长:230 nm。溶出介质分别为pH1.2、pH4.0、pH6.8、水,转速100rpm,37℃。当溶出介质为pH1.2时,在取样管中预加醋酸钠溶液对溶出液进行中和。对阿莫西林胶囊溶出液进行测定并计算累计溶出度,绘制溶出曲线。结果:阿莫西林浓度在24.71-370.6μg/mL范围内有良好的线性关系(R2=0.9998),各溶出介质中的回收率在100.02%-100.41%,RSD均1%。结论:该方法简便可行,解决了阿莫西林在酸性条件下检测不稳定的问题,可用于阿莫西林胶囊在不同溶出介质中溶出曲线的测定。     

壳聚糖酶高产菌株的筛选、产酶条件的优化及壳聚糖酶的分离纯化

从采集的土样中分离到3株产壳聚糖酶的菌株，经摇瓶复筛，菌株JH01产酶能力最强。对其发酵产酶条件的研究结果表明其产酶最适培养基组分为：壳聚糖2．0%，NaCl0．05％，MgSO4 0．05％，KH2PO4 0．075％，FeSO4 0．001％，牛肉膏0．3％，pH5．5。最适产酶培养条件为：40℃、180r／min培养48h。在最适产酶培养条件下，48h时菌株JH01发酵液中壳聚糖酶活力可达到26．03U／mL，产酶能力为国内已报道的最高值。经DEAE Cellulose52柱层析，壳聚糖酶被纯化了11．70倍。经SDS—PAGE鉴定，纯化后酶已达到电泳纯的程度，分子量为30kD。