新型温敏网络半互穿多孔水凝胶的制备及其固定化酶的研究

以甲基丙烯酸羟乙酯(Hydroxyethyl methacrylate,HEMA)、N,N-二乙基丙烯酰胺(N,N-diethyl-Acrylamide,DEAAm)为原材料,通过自由基聚合反应合成一种温敏型多孔水凝胶,经接枝反应引入乙烯基,制得新型温敏网络半互穿多孔水凝胶。利用红外光谱(IR)、核磁共振碳谱(13 C NMR),结合扫描电镜(SEM)表征中间产物和最终产物。采用称重法研究最终产物的溶胀、去溶胀动力学,分析其溶胀性能和温度响应性。运用点击反应原理,以新型温敏网络半互穿多孔水凝胶固定肌酸激酶。釆用BCA(Bicinchoninic Acid)蛋白试剂盒法测定酶的固载量,pH法测定酶活。结果表明,新型温敏水凝胶合成成功,肌酸激酶的平均固载量为24.77mg·g~(-1),肌酸激酶的平均酶活为9.67U·g~(-1)。该新型温敏水凝胶对肌酸激酶具有良好的选择性和温度响应性,对实现肌酸激酶的高效利用具有很好的借鉴意义。