不同诱导剂对工程菌发酵及重组蛋白表达的影响

目的观察不同诱导剂对工程菌发酵及HSP-MUC1重组蛋白表达的影响,从而选取最佳诱导表达条件。方法分别用IPTG和乳糖作为诱导剂,发酵表达HSP-MUCI重组蛋白质,并对重组蛋白质表达量和性状进行分析。结果用IPTG诱导发酵的菌体经普通匀浆法即可将细菌破碎;而用乳糖发酵的菌体经普通匀浆法不能破菌,通过延长发酵时间也能达到与IPTG诱导相同的表达量。结论乳糖可以作为基因工程重组蛋白的理想诱导剂。     

卡介苗热休克蛋白70对肿瘤细胞裂解物免疫原性的影响

目的:观察卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)对肿瘤细胞裂解物(TCL)免疫原性的影响,为TCL相关肿瘤疫苗的制备提供依据.方法:应用冻融法制备B16黑色素瘤细胞裂解物B16TCL,将BCGHSP70与B16TCL在体外混合制备BCGHSP70-B16TCL.将C57BL/6小鼠随机分为BCGHSP70-B16TCL组、PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组,分别于第1和14天皮下免疫BCGHSP70-B16TCL、PBS、BCGHSP70和B16TCL.于末次免疫后第7天处死小鼠,MTT法观察不同免疫组小鼠脾淋巴细胞在B16TCL体外刺激后的增殖情况,计算刺激指数(SI).结果:应用冻融法能够使B16细胞完全裂解,所制备的B16TCL中含有丰富的蛋白成分.与PBS组、BCGHSP70组和B16TCL组比较,BCGHSP70-B16TCL组免疫小鼠脾脏明显增大;BCGHSP70-B16TCL免疫组SI高于PBS免疫组(P=0.00)、B16TCL免疫组(P=0.01)和BCGHSP70免疫组(P=0.00).结论:BCGHSP70 能够增强B16TCL的免疫原性,提示BCGHSP70可能作为有效的免疫佐剂用于TCL相关肿瘤疫苗的研究.     

MUC1核心肽多克隆抗体的制备及鉴定

目的　制备MUC1核心肽多克隆抗体 ,用于靶向MUC1肿瘤治疗的研究。方法　以 8R -MUC1核心肽 6重复序列重组蛋白 (8R MUCPT)为抗原免疫家兔 ,以ELISA法确定抗MUC1多克隆抗体效价 ,以Westernblot和ELISA阻断试验鉴定抗体特异性。结果　MUC1核心肽多克隆抗体效价为 1∶2 5 6 0 0 0 ,能与MUC1核心肽特异性结合。结论　利用原核表达的 8R -MUCPT蛋白 ,可有效地诱导免疫动物产生MUC1核心肽特异性抗体 ,为MUC1核心肽靶向肿瘤特异性免疫研究提供了有力的实验材料。