p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的表达及W-7的干预作用

目的:探讨p38MAPK蛋白在体外培养神经元中的激活及钙调蛋白抑制剂W-7的干预作用.方法:神经元原代培养并采用NSE免疫细胞化学技术鉴定神经元.取原代培养7 d的大鼠皮质神经元随机分为5组:正常对照组,仅用DMEM/F12完全培养基;NMDA组,去除正常神经元培养液,加入NMDA 50 μmol·L-1,处理时间10 min;W-7干预组,W-7浓度分别为25、50和100 μmol·L-1,继续培养24 h,加入NMDA 50 μmol·L-1.免疫细胞化学染色法及免疫印记法检测皮质神经元内p38MAPK蛋白的表达水平.结果:培养6～12 h后大部分神经元贴壁,随时间延长形态多变,突起逐渐增多,神经元突起间互相接触形成网络.NSE鉴定神经元纯度为90.86%;免疫细胞化学染色法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7组低于NMDA组(P<0.05或P<0.01),呈剂量依赖性;Western blotting法检测,NMDA组p38MAPK蛋白表达水平高于对照组(P<0.05),W-7干预组p38 MAPK表达水平低于NMDA组(P<0.01),呈剂量依赖性.结论:NMDA导致皮质神经元p38MAPK蛋白表达增高,W-7可降低p38MAPK的蛋白表达.     

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