凝溶胶蛋白在C57BL／6小鼠急性放射肺损伤中的表达

为研究小鼠辐射诱导肺损伤后凝溶胶蛋白（Gelsolin,GSN）在血浆和肺组织中的表达,分别采用4Gy和20Gy剂量的X射线对C57BL／6小鼠进行全身及胸部单次照射。且在照射后取不同时间点ELISAKit检测小鼠血浆型Gelsolin（Plasma GSN,pGSN）蛋白含量和Westernblot法检测小鼠肺组织胞浆型Gelsolin（Cytoplasmic GSN,cGSN）蛋白含量。同时,检测20GyX射线胸部照射后不同时间点小鼠右肺肺泡灌洗液（Bronchoalveolar lavage fluid, BALF）中的细胞总数和总蛋白的含量。结果表明,全身照射组小鼠在照射后24h时,pGSN水平降低,而胸部照射组pGSN水平在24—48h持续降低,下降速度慢于全身照射组,之后两组pGSN均逐渐上升。在照射后24h时小鼠肺组织cGSN含量低于正常水平,照射后48h时则高于正常水平,48-96h持续下降。但在照射后96h时全身照射组cGSN含量恢复到正常,胸部照射组仍高于正常水平。小鼠胸部照射后在24h时,右肺BALF中细胞总数和总蛋白浓度显著高于正常水平,约达正常值的16倍,24—96h持续下降,与肺组织cGSN含量变化存在一定程度的负相关。推测GSN可能促进急性放射肺损伤的修复。     

GSN antibody pretreatment aggravates radiation-induced lung injury in mice

Radiation-induced lung injury is one of the main dose limiting factors for thoracic radiation therapy.Gelsolin(GSN) is a widespread,multifunctional regulator of cellular structure and metabolism.In this work,the roles of GSN in radiation-induced lung injury in Balb/c mice were studied.The GSN levels in plasma reduced progressively in 72 hours after irradiation,and then increased gradually.GSN contents in the bronchoalveolar lavage(BAL) fluid increased after thoracic irradiation,whereas mRNA levels of GSN in the lung tissue decreased significantly within 24 hours after irradiation and then increased again.Mice were intravenously injected with 50 ug GSN antibody 0.5 hour before 20 Gy of thoracic irradiation.GSN antibody pretreatment increased lung inflammation,protein concentration in the BAL fluid and leukocytes infiltration in the irradiated mice.The activities of superoxidase dismutase(SOD) in the plasma and the BAL fluid in irradiated mice injected with GSN antibody were less than that of control groups,whereas the levels of malondialdehyde(MDA)increased.These results suggest that pretreatment of GSN antibody may aggravate radiation-induced pneumonitis.     

DCX和SPARC基因共表达增强X射线对人脑胶质瘤细胞U-87MG凋亡的影响

用激光共聚焦显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达、流式细胞仪检测GFP表达比例确定重组腺病毒对U-87MG细胞的最佳感染剂量;RT-PCR和Western blot法检测DCX和SPARC在U-87MG细胞mRNA和蛋白水平的表达;流式细胞仪检测Ad-GFP、Ad-DCX、Ad-SPARC和Ad-DCX-SPARC对X射线诱导U-87MG细胞凋亡的影响。实验结果表明:重组腺病毒对U-87MG细胞的最佳感染剂量为50 MOI;目的基因DCX和SPARC可在mRNA和蛋白水平成功表达;Ad-GFP、Ad-DCX、Ad-SPARC和Ad-DCX-SPARC单纯基因组的凋亡率分别为(1.05±0.42)%、(1.11±0.29)%、(1.18±0.37)%和(1.12±0.40)%;8 Gy剂量辐照后,凋亡率分别为(7.54±0.47)%、(23.23±2.72)%、(16.43±1.13)%和(33.01±2.67)%。提示Ad-DCX-SPARC可以增强X射线诱导的U-87MG细胞的凋亡,从而增强放射敏感性。     

STAT3抑制剂WP1066对乏氧人脑胶质瘤细胞U251放射敏感性的影响

采用CoCl2处理U251细胞模拟细胞乏氧,用甲基四唑蓝(MTT)法检测U251细胞活力的改变;RT-PCR和Western blot检测HIF-1α在U251细胞中的mRNA和蛋白水平的表达;克隆形成法检测X射线照射下不同处理组的克隆形成率。结果表明,100μmol·L-1 CoCl2处理及100μmol·L-1 CoCl2与0.5μmol·L-1 WP1066联合处理U251细胞24 h无明显细胞毒性作用(p0.05);CoCl2诱导HIF-1α的mRNA及蛋白表达水平上调,WP1066抑制HIF-1α在蛋白水平的表达;与空白对照组相比,CoCl2组的克隆形成能力明显上调(p0.05),CoCl2与WP1066联合处理组克隆形成能力明显下降(p0.05)。WP1066可增加乏氧U251细胞放射敏感性,其机制可能是通过抑制STAT3通路降低HIF-1α的表达而发挥放射增敏作用。     

WORT增强γ射线对SHG44细胞周期及凋亡的影响

研究渥曼青霉素（Wortmannin,WORT）对人脑胶质瘤细胞辐射增敏作用及诱导细胞凋亡。用克隆法、流式细胞术和激光共聚焦显微镜扫描技术检测细胞克隆形成、细胞周期和凋亡以及凋亡的形态学特征。结果表明：WORT能抑制细胞克隆形成,和^60Coγ射线联用抑制作用增强,表现出协同作用。WORT和^60Coγ射线联用能引起SHG-44细胞G1期阻滞,WORT能增强^60Coγ射线诱导的细胞凋亡,凋亡细胞核固缩和核碎裂,可见凋亡小体。以上结果表明,WORT可能通过诱导细胞G1期阻滞和凋亡途径来增加细胞的辐射敏感性。     

EGFR与肿瘤细胞放射敏感性

表皮生长因子（Epidermal growth factor receptor，EGFR）属于酪氨酸激酶受体，在多种上皮来源的恶性肿瘤中存在着过度表达和变异。EGFR与相应配体结合后激活，继而活化一系列下游信号通路并产生众多的生物效应。EGFR信号通路与肿瘤细胞放射敏感性降低密切相关，其机制可能与促进细胞增殖、抑制凋亡、调控细胞周期阻滞、促进DNA辐射损伤修复有关，运用EGFR单克隆抗体和小分子特异性抑制剂可以增强肿瘤细胞的放射敏感性。