卷烟烟气有害成分联合作用的细胞毒性

为评价卷烟烟气有害成分的细胞毒性及其联合作用,以人支气管上皮细胞(BEASe-2B细胞)为靶细胞,分别用卷烟烟气中5种有害成分4-甲基亚硝基-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)、氨、苯并[a]芘、苯酚和巴豆醛单独及两两联合染毒,用MTT法测定染毒24 h后的细胞存活率,计算细胞的平均半数致死剂量(LC50),用效应图解法对联合作用进行评价.结果显示:①NNK、氨、苯并[a]芘、苯酚和巴豆醛的LC50分别为87.2、395.5、5.4、61.9和6.9 mg/L;②NNK与氨、NNK与苯并[a]芘、NNK与苯酚、NNK与巴豆醛、氨与苯并[a]芘、氨与苯酚、氨与巴豆醛、苯并[a]芘与苯酚、苯并[a]芘与巴豆醛、苯酚与巴豆醛的LC50分别为46.2、10.9、14.1、30.4、76.4、86.1、39.0、6.1、1.1和22.1 mg/L;③(NNK与氨、NNK与苯并[a]芘、NNK与苯酚、苯并[a]芘与苯酚、苯并[a]芘与巴豆醛、氨与巴豆醛存在明显的协同作用,而NNK与巴豆醛、苯并[a]芘与氨、苯酚与氨、苯酚与巴豆醛之间无协同作用.因此,卷烟烟气有害成分的细胞毒性存在明显差异,其联合作用的细胞毒性效应各不相同.     

S波段微波照射对大鼠免疫功能的影响

用S波段高功率微波照射大鼠,观察大鼠白细胞计数、淋巴细胞数、T细胞及其亚群和免疫球蛋白的变化,以期了解S波段高功率微波照射对大鼠免疫功能的影响.结果表明,S波段高功率微波照射可以引起大鼠白细胞水平降低,T细胞亚群出现兴奋效应,免疫球蛋白早期出现不同程度的降低,表现出低剂量刺激而高剂量抑制的效应.     

NNK和B[a]P在卷烟烟气复杂基质中的联合遗传毒性

为对卷烟进行安全性评价,以肯塔基参比卷烟3R4F为研究对象,以B[a]P、NNK为目标化合物,采用检测哺乳动物细胞致突变性的微核试验,结合三者对人体支气管上皮细胞的毒性作用,分析了B[a]P、NNK在卷烟烟气复杂基质中的联合作用.结果表明:(1)B[a]P、NNK与CSC均具有体外细胞遗传毒性;(2)两两联合作用诱发细胞微核存在一定的拮抗效应;(3)三者联合作用呈现一定的协同作用.     

盐诱导激酶2对电离辐射诱导的自噬与凋亡的影响

为探索盐诱导激酶2(salt-inducible kinase 2, SIK2)对电离辐射引起的自噬与凋亡的影响,以期为肿瘤的放射治疗提供新的思路,以慢病毒颗粒LV-GFP和LV-SIK2体外转染HeLa细胞,48 h后用荧光显微镜观察转染是否成功,RT-PCR和Western blot检测转染细胞SIK2的干扰效果。通过Western blot检测SIK2低表达对8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射下细胞中自噬相关蛋白LC3-Ⅱ 和P62表达的影响来观察自噬的变化;利用流式细胞术来检测SIK2低表达对8 Gy ⁶⁰Co γ射线照射下细胞凋亡的影响。结果表明,SIK2低表达的稳转细胞系被成功构建;8 Gy γ射线照射后,SIK2低表达细胞系LC3-Ⅱ表达下调,P62表达上调,表明自噬被减弱;流式细胞术检测发现SIK2低表达细胞系在照后12 h FITC⁺PI^-细胞比例就显著增加,表明SIK2低表达增加了细胞凋亡。因此,SIK2低表达会导致电离辐射引起的细胞自噬大大减弱,凋亡显著增加。     

NNK和B[a]P在卷烟烟气基质中的联合致突变性

以苯并[a]芘(B[a]P)、甲基亚硝胺吡啶基丁酮(NNK)为目标化合物,设置卷烟烟气冷凝物(CSC)的浓度为0(CK),0.005,0.010,0.015,0.020 mg/mL;NNK的浓度为0(CK),0.005,0.010,0.020,0.040 mg/mL;B[a]P的浓度为0(CK),0.00025,0.00050,0.00075,0.00100 mg/mL,研究了NNK,B[a]P和CSC的联合致突变性。结果表明:①CSC,NNK和B[a]P均可诱导鼠伤寒沙门氏菌TA98,TA100发生突变,且剂量-效应明显。②B[a]P与CSC联合呈相加作用;B[a]P与NNK联合高剂量呈弱相加作用;CSC与NNK联合低剂量呈弱相加作用。③在不同情况下,三者联合作用致TA98呈弱相加作用。综上,NNK和B[a]P在卷烟烟气基质中的联合致突变性呈现量效、时效和先后作用顺序的复杂性。     

卷烟烟气冷凝物致细胞恶性转化研究

观察卷烟烟气冷凝物（CSC）单次及多次染毒对细胞恶性化的不同影响。方法：以不同浓度CSC染毒,观察单次及多次染毒后BEP2D细胞血清抗性和倍增时间、锚着独立生长能力以及叙利亚地鼠胚胎细胞（SHE）转化频率的改变。结果：BEP2D细胞染毒5周后除单次低剂量组外均出现血清抗性,锚着独立实验多次染毒组克隆形成率均比相同剂量单次染毒组高,且与剂量呈反比;SHE细胞多次染毒组比相应剂量单次染毒细胞接种效率低,转化效率增加。结论：CSC多次染毒诱导细胞恶性化能力较单次染毒高,且低剂量较高剂量更易致细胞恶性化。     

香烟凝集物诱导大鼠肺巨噬细胞细胞因子释放及调控研究

目的：观察香烟凝集物（CSC）对大鼠肺巨噬细胞分泌细胞因子的影响及MAPK、NF—κB信号通路的调控作用。方法：CSC染毒原代大鼠肺巨噬细胞,蛋白液体悬浮芯片检测细胞因子的表达,westernblot检测ERK1／2、p38和IKBα磷酸化水平。结果：CSC诱发IL-1β、TNFα、IL一6、MCP-1、IL-18、GRO等细胞因子表达量明显增高,MIP1α与IL-10水平下降,ERK1／2、p38及IKBd磷酸化水平上调;制剂ERK1／2,p38和NF—κB可显著下调TNF一α、MIP-1α及GRO表达。结论：MAPK和NF-κB通路参与肺巨噬细胞多种细胞因子表达的改变。     

NNK腹腔注射对小鼠免疫功能的影响

为研究4-(甲基亚硝氨基)-1-(3-吡啶基)-1-丁酮(NNK)对小鼠免疫功能的影响,将小鼠随机分为正常对照组、阳性对照组(环磷酰胺,200 mg/kg)及NNK低、中和高剂量组(150,300,600μmol/kg),腹腔注射染毒7 d后,测定小鼠血常规,取胸腺、脾脏称量并计算胸腺指数、脾脏指数,采用荧光显微镜计数法检测腹腔巨噬细胞吞噬功能,定量溶血分光光度法测定抗体生成细胞(PFC)功能,足趾厚度增加法检测迟发型变态反应(DTH),流式细胞术检测T淋巴细胞亚群。结果表明:与正常对照组相比,①NNK低剂量组可使小鼠DTH降低28.97%(P0.05);②中、高剂量组可使小鼠血小板数、胸腺质量、胸腺指数、DTH、PFC、巨噬细胞吞噬率和吞噬指数分别降低17.50%~18.15%,44.82%~50.00%,44.50%~44.93%,38.91%~55.79%,18.84%~27.53%,23.79%~29.75%和26.35%~28.14%(P0.05);③高剂量组还可使脾脏质量和CD3+CD8+T淋巴细胞的比率分别降低19.67%和23.63%(P0.05)。     

巴豆醛诱导人支气管上皮细胞凋亡研究

为了评价卷烟烟气的危害性,研究了巴豆醛导致人支气管上皮细胞BEAS-2B死亡机制.即采用MTT法检测细胞存活率,化学发光法检测胞内ATP含量,流式细胞仪检测细胞凋亡率,流式细胞仪结合免疫化学检测线粒体细胞色素c,化学发光法检测caspase-9,caspase-3/7.结果显示,巴豆醛诱导细胞凋亡,且随着剂量增大,细胞由凋亡转向坏死.巴豆醛导致胞内ATP水平迅速下降,导致细胞线粒体膜电位下降,导致细胞色素c由线粒体释放至胞浆,激活caspase-9和caspase-3/7.结论:巴豆醛诱导细胞凋亡,且caspase级联酶参与巴豆醛诱导的细胞凋亡.