3-甾酮-△^-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△^1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶。能催化3-甾酮化合物在C1.2位处脱氢，提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a，实现了简单节杆菌3-甾酮-△^-脱氢酶在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析．并用分光先度法检测酶的活力。结果表明，表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在。利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白，复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

山茱萸果汁RP-HPLC梯度洗脱优化实验研究

采用反相高效液相色谱(RP-HPLC),建立山茱萸果汁定性定量分析方法.经梯度洗脱优化出的色谱条件为:用Hypersil GOLD C18色谱柱,以体积分数为0.1%磷酸水溶液(含2%乙腈)为流动相A,乙腈为流动相B,梯度洗脱时间分别为0、8、12、26和55 min时,B体积分数(%)分别为0、0、8、8和26,流速为1.0 mL/min,柱温为35 ℃,波长为259 nm.采用中位数法筛选10批山茱萸果汁HPLC图谱的特征峰,确定15个共有峰为果汁定性分析的指标峰.以马钱苷吸收峰为参照,对果汁HPLC图谱中马钱苷进行定量测定,其线性范围为0.092～0.920 μg,平均回收率为99.06%(RSD=1.62%),马钱苷平均含量为2.162 mg/mL(n=10).     

低温碱性脂肪酶产生菌的筛选及产酶培养基的优化

以橄榄油为唯一碳源,从渤海湾盐碱地被油污染的土样中分离筛选出1株产低温碱性脂肪酶菌株34-5,初步酶学性质研究表明,该菌所产脂肪酶的最适温度为25℃,最适pH为9．6,该菌的16S rDNA基因序列与伯克霍尔德氏菌（Burkholderia）的同源性为99％摇瓶实验表明,该菌株最适产酶培养基为（g／L）;淀粉10,黄豆饼粉20,玉米浆20,K2HPO4 1,聚乙烯醇大豆油乳化液20．其最高酶活为6．87U／mL。     

枯草芽孢杆菌谷氨酰胺转氨酶的异源表达

以野生型枯草芽孢杆菌基因组DNA为模板,PCR扩增获得带有sD序列及谷氨酸棒状杆菌信号肽AS0949的BTG基因。将其与大肠杆菌-谷氨酸棒状杆菌穿梭表达载体pXMJ19连接,构建重组质粒pXMJ19-Sbtf转化谷氨酸棒状杆菌ATCC13032。经IPTG诱导后该重组茵发酵液具有交联酪蛋白的能力,表明该重组茵能够实现分泌表达。     

脯氨酰内肽酶水解啤酒蛋白的研究

将脯氨酰内肽酶(PEP)添加在啤酒后酵液中,通过冷混浊实验分析脯氨酰内肽酶对啤酒非生物稳定性的影响。结果表明,添加5mg/L的脯氨酰内肽酶就能有效地提高啤酒的非生物稳定性;采用75%硫酸铵沉淀啤酒蛋白,进行SDS-PAGE电泳分析,结果显示,啤酒蛋白电泳图谱的分布主要表现为8～14.4 ku的窄带和35～45 ku的宽带,而经脯氨酰内肽酶处理的啤酒蛋白电泳图谱中8～14.4 ku的条带消失,说明此蛋白被脯氨酰内肽酶水解。     

甜蛋白monellin基因在酿酒酵母中的分泌表达

人工合成的单链甜蛋白monellin基因与经改造后的基因分别克隆到带有酵母半乳糖可诱导启动子GAL1的穿梭表达质粒pYES2.0中,得到表达载体pYESM及pYESMT。在表达载体pYESMT中,monellin基因的上游连接酿酒酵母的α-信号肽序列,得到分泌表达载体pYESMTA。分别将3个重组质粒转化酿酒酵母菌株INVsc1中进行表达。具有突变monellin基因的菌株INVMT/pYESMT的monellin蛋白表达量明显高于含monellin基因的菌株。而含有pYESMTA的菌株可将monellin基因分泌到胞外,表明α-信号肽序列能很好地将酿酒酵母中的重组monellin蛋白引导到胞外,完成分泌表达,且表达产物具有生物活性。     

赤霞珠干红葡萄酒产地识别的研究

以取自不同产地的37个赤霞珠干红葡萄酒样品的38项指标的检测结果为数据,用主成分分析（PCA）筛选出8个有代表性的主成分,利用其因子得分进行产地判别分析（DA）,判别效果较好,其中昌黎、蓟县、贺兰山A和贺兰山B4个产地100％识别,南疆、北疆识别效果略差,但总识别率达到86．5％,并建立了判别方程模型。     

基于蛋白质交联的氧化酶特性与应用

蛋白质交联属于蛋白质改性修饰的一部分,是重组食品与新型食品制造的重要内容。与化学交联、物理交联相比,酶法交联因其反应条件温和、不产生副产物、交联效果好等特点,成为最为容易接受的一种蛋白质交联方式。除谷氨酰胺转胺酶外,一些氧化酶也被证明能够在蛋白质分子间形成共价键而形成交联。介绍了目前应用较多的酚氧化酶(酪氨酸酶、漆酶)、过氧化物酶以及赖氨酰氧化酶的酶学性质、交联机制等,并对其在食品蛋白质交联中研究现状以及潜在应用进行总结与展望。     

耐酸性高温α-淀粉酶突变基因在大肠杆菌中的表达及酶学性质研究

利用表达载体pET-30a,实现了去信号肽的耐酸性高温α-淀粉酶突变基因amyd及未突变的高温α-淀粉酶基因amy在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达。经多步纯化,重组酶AMY及AMYD的比活分别达到312.7U/mg蛋白和354.6U/mg蛋白,纯化倍数分别为75.90和83.83,获得凝胶电泳条带单一的蛋白样品,经SDS-PAGE检测,AMY及AMYD酶分子质量均为63.5ku。重组酶AMY的最适温度80℃,最适反应pH为6.5,在温度低于90℃,反应pH5.5~7时,酶活较稳定。重组酶AMYD的最适温度80℃,最适反应pH为4.5,在温度低于90℃,反应pH4.0~6.5时,酶活较稳定。     

低聚木糖的模拟移动床色谱分离研究

研究了用模拟移动床色谱分离高含量低聚木糖的工艺。首先通过单柱固定床实验来选择适合低聚木糖分离的固定相,比较了不同类型的离子交换树脂对低聚木糖和单糖混合液的分离度和分离效率．筛选出DIAION—UBK530Na树脂为合适的分离介质;然后运用真实移动床模型,近似确立模拟移动床色谱分离工艺的初始操作参数．在理论分离原理的指导下,优化分离条件,在阀切换时间为300s、进料流量和洗脱流量分别为3．5mL／min和5ml/min、提取液和提余液流量分别为3．8mL／min和4．7mL／min、同时循环流量控制在8．9mL／min的条件下．使分离后的低聚木糖、单糖纯度均在90％以上,收率分别达到91．55％和92．18％。