甲基苯丙胺免疫层析测试条的研制

采用枸橼酸三钠还原氯金酸制备胶体金颗粒，标记甲基苯丙胺单克隆抗体，制成免疫层析测试条，建立了一种简易快速、自测式胶体金免疫层析法，并用于尿液中甲基苯丙胺的检测。尿液中的甲基苯丙胺与测试条上金标记抗体结合后沿着硝酸纤维素膜移动，与膜上的固相二抗或抗原结合，根据是否出现肉眼可见的红色线条判断人体尿液中是否含有甲基苯丙胺。结果显示，甲基苯丙胺免疫层析测试条只与甲基苯丙胺发生特异性反应，符合中国药品生物制品检定所制定的检测甲基苯丙胺标准品的标准，灵敏度为1000μg／L，与典型的麻醉药物和镇静药物无交叉反应。甲基苯丙胺免疫层析测试条检测尿液中的甲基苯丙胺具有特异性强、灵敏度高、结果显示清楚、快速、简便、省时、实用等特点。     

甲基苯丙胺和吗啡单克隆抗体的制备及初步应用

分别以甲基苯丙胺-牛血清白蛋白（BSA）联接物和吗啡-BSA联接物为免疫原免疫Balb/c小鼠,采用细胞融合技术制备了抗甲基苯丙胺（MA）单克隆抗体及抗吗啡（MP）单克隆抗体,获得了能够稳定分泌阳性抗MA杂交瘤细胞3株（BD1、BD2、BD10）和抗MP杂交瘤细胞4株（MP6A8、MP6D9、MP7D6、MP8D9）。 3株MA单克隆细胞株均为λ链IgG1型。用它们诱发的腹水亲合常数均大于107L/mol（RIA）。对50多种药物进行的交叉反应实验表明,三株MA单抗都达到免疫分析应用要求。其中,BD10单抗在ELISA及胶体金标记快速检测板、BD1、BD2在RIA的应用中取得了较好的效果。     

抗T4单克隆抗体的制备及特性鉴定

本工作采用T4-BSA联结物免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术,形成杂交瘤细胞。应用放免分析方法进行筛选,对阳性孔细胞经反复克隆化,获得了4株稳定分泌高特异性抗T4单克隆抗体的杂交瘤细胞系:T410D11、T415B11、T413A4、T409F6。这些细胞经冻存后仍能稳定分泌抗体。 将获得的杂交瘤细胞接种于BALB/c小鼠腹腔内,收集到含高效价单克隆抗体的腹水。放免分析结果显示:这些单抗对T4表现高亲和性和高特异性,Ka>108L/mol,与T3交叉反应