TagS750-Cas9核酸酶的制备及体内代谢分布研究

Cas9核酸酶在CRISPR/Cas9系统中执行切割靶标脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)的重要功能,研究其在体内的代谢行为对活体水平的基因编辑具有重要的指导意义。本工作采用N-羟基琥珀酰亚胺酯键将近红外荧光染料Vivo TagS750与Cas9蛋白偶联,制备了标记率高达99%的TagS750-Cas9融合蛋白。采用荧光强度监测以及琼脂糖凝胶电泳的方法对Cas9蛋白在常见生理缓冲溶液中的稳定性及切割活性进行了鉴定,并将其尾静脉注射到BALB/c小鼠体内,通过监测TagS750-Cas9蛋白荧光强度的变化对其在体内的代谢和分布进行了研究。结果表明:TagS750-Cas9蛋白的体外稳定性良好,表面标记的TagS750并不影响Cas9蛋白的切割活性。TagS750-Cas9蛋白进入体内后,平均血浆消除半衰期(t1/2β)为55 h;主要分布于肝、肾、肺、脾脏中,心脏的分布较少;72 h可被机体完全代谢清除。研究结果为CRISPR/Cas9系统中Cas9核酸酶的体内应用奠定了基础。     

关于岩土材料屈服破坏准则的若干问题研究

岩土材料的屈服破坏准则问题是岩士工程中最基础也是最为重要的问题，前人对此已开展了大量的研究工作并取得了丰富的研究成果，但由于岩土材料力学性质的复杂性，目前仍存在一些问题尚存在诸多争议，例如如何反映岩土材料不同于金属的特殊力学性质，如何建立岩土材料的能量屈服准则，如何描述破坏，仍有待进一步研究。本文首先论述了这一问题的提出，明确相关概念，之后分析了屈服破坏准则的概念和条件，进而论述了岩土破坏准则的几个基本问题，以期能够引起更多的人对该问题的关注。     

电转条件对Cas9核糖核蛋白基因编辑效率的影响

直接向细胞内输运CRISPR/Cas9核糖核蛋白复合物(Cas9 RNP)对于进行各种基因编辑、基因表达调控和DNA/RNA成像具有重要意义。电转是向细胞内导入Cas9 RNP的重要方法。本工作研究了电压、脉冲长度及脉冲次数等电转条件对Cas9 RNP细胞内基因编辑效率的影响,评估了不同电转条件下的细胞存活率。结果显示:电压为1 300 V,脉冲次数为1,脉冲宽度为30 ms时,Cas9 RNP具有较高的基因编辑效率且生物安全性较好。本工作为CRISPR/Cas9复合物进一步的生物医学应用提供了指导依据。