ErbB2 RNA干扰联合60Coγ照射对U251细胞增殖及凋亡的影响

构建特异性抑制白血病病毒致癌基因同源体2(ErbB2)的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并检测联合60Coγ照射对U251细胞增殖抑制及促进凋亡作用.设计、合成ErbB2特异性的19bp短链寡核苷酸,经退火形成双链DNA片段,克隆到Psilence2.1-U6-H1载体中,构建ErbB2特异siRNA的表达载体,Hind Ⅲ和BamHI双酶切及测序鉴定重组体,并转染U251细胞,四甲基偶氮唑盐法(Methylthiazolyl tetrazolium assay,MTT)检测细胞增殖活性,Hoechst 33258染色,Annexin-Ⅴ检测细胞凋亡情况.经双酶切与测序鉴定成功构建ErbB2-siRNA表达载体,转染星型胶质瘤细胞株U251细胞可显著抑制细胞增殖活性(p＜0.05),并诱导细胞产生时间依赖性凋亡,24h凋亡细胞百分比增加10.52%,48h凋亡细胞百分比增加50.65%.联合60Coγ照射U251细胞增殖活性较单独转染进一步显著降低(p＜0.05).运用Psilence2.1-U6-H1载体构建的ErbB2-siRNA表达载体可有效抑制U251细胞增殖并促进时间依赖性细胞凋亡;联合60Coγ照射可增加增殖抑制效果.     

钙结合蛋白S100A8在放射性肺纤维化早期的表达及意义

本研究结合体内外实验,探讨了钙结合蛋白S100A8在放射性肺纤维化早期的表达及意义.20Gy6oCoγ射线全胸照射大鼠,建立大鼠放射性肺纤维化模型,分别于照射后1周、2周及4周活杀后取肺,采用免疫组化方法检测S100A8蛋白水平的变化;采用RT-PCR方法检测S100A8及与其形成复合物的S100A9 mRNA水平的变化.对于体外培养的小鼠巨噬细胞RAW264.7,采用T-PCR方法检测该细胞受γ射线与脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)处理后S100A8 mRNA水平的变化.照射后4周,S100A8蛋白在大鼠肺部巨噬细胞胞浆增强表达,S100A8和S100A9 mRNA在大鼠肺部也增强表达.结果表明,RAW264.7细胞中,γ射线与LPS能够协同作用增强该细胞S100A8 mRNA的表达.S100A8在放射性肺纤维化早期于巨噬细胞表达增强,发挥其趋化活性,参与炎症发生,进而在放射性肺纤维化形成过程中发挥作用.     

钙结合蛋白S100A8在辐射损伤小鼠骨髓细胞的表达及意义

本文研究了钙结合蛋白S100A8在辐射损伤小鼠骨髓细胞中的表达,及其与细胞周期、凋亡的关系.运用蛋白/DNA双参数流式细胞技术,比较3.5、7 Gy 60Coγ射线照射后6 h小鼠骨髓中S100A8蛋白的表达变化,及S100A8阳性(S100A8 )与s100A8阴性(S100A8-)细胞周期和凋亡的改变.正常小鼠骨髓中,S100A8 细胞主要是粒细胞;与S100A8-细胞相比,S100A8 细胞增殖不活跃.辐射损伤后早期,小鼠骨髓中S100A8 细胞数及S100A8蛋白表达量无明显改变,S100A8-细胞发生G2/M期阻滞及凋亡.而S100A8 细胞周期不改变,也不发生凋亡.结果表明,S100A8 细胞相对S100A8-细胞具有辐射抗性.     

DNA微阵列技术在辐射诱导基因表达研究中的运用

综述了辐射诱导基因表达的复杂性，以及近年来DNA微阵列技术在辐射诱导基因表达研究中的运用，并就辐射诱导基因可能为放射病诊断治疗研究提供新思路进行探讨。     

钙结合蛋白S100A8在γ射线损伤小鼠巨噬细胞RAW264.7中的作用

为探索钙结合蛋白S100A8在γ射线对造血免疫系统损伤中的作用,构建S100A8真核表达载体,转染小鼠巨噬细胞RAW264.7,研究S100A8在γ射线诱导RAW264.7细胞周期紊乱和胞内活性氧改变中的作用。运用RT-PCR和细胞荧光免疫方法鉴定增强表达S100A8的RAW264.7稳定细胞克隆。流式技术检测10Gyγ射线照射6h后细胞周期及H2O2刺激后胞内活性氧的变化。结果显示,与转染空质粒的对照细胞相比,增强表达S100A8细胞克隆G0/G1期细胞比例增高,S期细胞减少,不发生G2/M阻滞;并且H2O2作用后细胞中活性氧水平低于转染空白质粒的细胞。因此,增强表达S100A8的RAW264.7细胞与转染空白质粒细胞相比对辐射更具抗性,其可能原因是与增强表达的S100A8分子具有抗氧化功能有关。     

DNA微阵列技术在辐射诱导基因表达研究中的运用

综述了辐射诱导基因表达的复杂性，以及近年来DNA微阵列技术在辐射诱导基因表达研究中的运用，并就辐射诱导基因可能为放射病诊断治疗研究提供新思路进行探讨。