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目的 建立人肝细胞生长因子α链 (rhHGFα)高效原核表达体系。方法 以pRC/CMV hHGF为模板 ,扩增hHGFαcDNA ,继以XhoI酶切为 386和 95 4bp 2个片段 ,亚克隆入pBSKS,DNA测序后 ,将上述两个片段与pBV2 2 0连接 ,构建重组质粒。转化E .coliJM10 9、DH5α和BL2 1(DE3) ,筛选高效表达菌株。分离包涵体 ,8mol/L尿素溶解 ,梯度复性后利用反相和凝胶过滤层析纯化重组蛋白 ,经MTT法检测活性。结果 所克隆的hHGFα基因序列正确 ,筛选出高效表达菌株BY ,经SDS-PAGE显示在相对分子质量 5 2 0 0 0处出现特异的目的蛋白表达带 ,表达量约占全菌蛋白的 2 5 %。表达产物以不溶性的包涵体 (IBs)形式存在 ,复性后具有刺激原代大鼠肝细胞生长的作用。结论 已成功表达了rhHGFα蛋白 ,为研究rhHGFα结构与功能及中试生产奠定了基础。 相似文献
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合闸电阻作为断路器合闸过程中合闸涌流、操作过电压抑制的重要部件,主要应用在800 kV及以上电压等级输电线路与换流变电站交流滤波器场,其特殊的应用环境导致其故障率较均压电容、支撑绝缘件等其他电气部件高。然而,在合闸电阻日常运维与故障诊断过程中,无相应的标准与系统的方法对其是否存在缺陷以及故障后的故障原因进行分析。本文首先对合闸电阻特性参数与工作原理进行介绍,之后对串联结构断路器与并联结构断路器分别进行运行可靠性与故障诊断技术研究。提出了动态电阻拟合、声振信号检测、绝缘性能测试、热容量测试等断路器运行过程中合闸电阻状态监测方法,以及基于ICP的合闸电阻堆拼接、应力特性分析、电场仿真等合闸电阻故障诊断方法,最后通过设备解体验证了所提方法在合闸电阻运行状态检测过程中的可行性。 相似文献
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目的 探讨人类白细胞抗原(human leucocyte antigen,HLA)-DPA1基因多态性与无胚胎妊娠的相关性.方法 选取110例无胚胎妊娠病例,同时以150例非自然流产对象作为对照组(两组均为汉族),采集妊娠期外周血,通过高通量DNA技术分析HLA-DPA1基因的14个单核苷酸多态性(single nuc... 相似文献
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目的纯化赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并鉴定其活性。方法将制备的赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白粗提液透析后,经Bio-CAD CM柱层析系统非连续梯度洗脱,收集洗脱峰,对有活性的梯度洗脱峰样品进行单向聚丙烯酰胺凝胶电泳(1D-PAGE)及切胶纯化,将切胶回收纯化的蛋白样品进行双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE),回收蛋白,进行活性和浓度检测。结果透析后的蛋白粗提液经Bio-CAD CM柱层析分离,得到3个不同洗脱梯度的可降解DNA的活性峰,3个梯度蛋白的PAGE带型基本一致,经PAGE分离获得3个核酸酶样蛋白纯品EWD1、EWD2和EWD3,得率和纯化倍数分别为:27.9%,11.6;16.7%,11.2;16.7%,18.6。结论成功纯化了赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白,并保持了其良好的生物活性。该纯化方法简单、快速、经济、实用,为该蛋白结构及功能的进一步研究奠定了基础。 相似文献
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目的建立去除抗肝癌基因疫苗pVAX1-aLCGV内毒素的方法。方法采用Triton X-114液相分离法去除抗肝癌基因疫苗中的内毒素,鲎试剂法检测疫苗中的内毒素含量,家兔法复试,ELISA法检测内毒素入血前后血浆中细胞因子TNF-α和IL-8的含量及疫苗的免疫原性,并比较处理前后的基因疫苗转染SMMC-7721和HepG2细胞的转染效率。结果经Triton X-114处理后,基因疫苗的内毒素含量及热原检测均合格;内毒素入血后,血浆中TNF-α和IL-8的含量均明显升高;疫苗的免疫原性与处理前比较,差异无统计学意义;处理后疫苗质粒的细胞转染效率增高。结论 Triton X-114能有效去除基因疫苗pVAX1-aLCGV中的内毒素,为其临床应用奠定了基础。 相似文献
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人纤溶酶原饼环区5蛋白的原核表达体系的建立 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 构建人纤溶酶原饼环区 5 (hPK 5 )蛋白原核表达载体 ,并进行表达和鉴定 ,为获取大量高纯度、具有生物活性的hPK 5蛋白奠定基础。方法 以纤溶酶原cDNA为模板 ,PCR扩增hPK 5基因 ,经酶切后构建表达载体pBV2 2 0 /hPK 5 ,转入大肠杆菌JM10 9进行温控诱导表达 ,表达产物经纯化、复性后 ,检测其抑制鸡胚绒毛尿囊膜 (CAM)血管新生的生物学活性。结果 带有pBV2 2 0 /hPK 5的大肠杆菌表达的目的蛋白占菌体总蛋白的34 8% ,其表达蛋白具有His tag抗原活性和野生活性。结论 已成功构建了pBV2 2 0 /hPK 5重组质粒 ,并在大肠杆菌中获得高效表达。 相似文献
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AoGDW肽固相合成工艺研究 总被引:1,自引:0,他引:1
用Wang树脂,以HBTU/HOBT/DIEA(1:1:2),HOBT/DIC(1:1)为缩合剂,DCM、DMF、NMP、THF、DMF/DCM(1:1)、DMF/DCM(1:7)为溶剂,Fmoc-氨基酸物质的量为4倍,不同的反应浓度,从而筛选出AoGDW肽合成的最佳缩合剂、溶剂、反应浓度.树脂-肽复合物用TFA/H2O/TIS(95:2.5:2.5)为裂解液,粗肽经ESI/MS鉴定,用RP-HPLC分离纯化.结果证明:Wang树脂在以HOTU/HOBT/DIEA(1:1:2)为缩合剂,以DCM,DMF/DCM(1:1),DMF/DCM(1:7)为溶剂,反应浓度在0.124~0.248 mol/L时,氨基酸的连接率及肽的最终产率最高.粗肽经ESI/MS分析,证明相对分子质量与理论值一致;经RP-HPLC纯化,获得纯度为99.7%的目标肽. 相似文献
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高压开关柜的运行状态对电力系统运行可靠性具有重要影响,带电检测是反映开关柜绝缘缺陷的有效手段。超声波(AE)、特高频(UHF)及暂态地电压(TEV)等多种局部放电检测技术在开关柜内金属部件异常放电的定性、定位具有一定优势。由于开关柜穿墙套管内部发生局部放电产生的电磁波经过多次折反射,导致检测点的信号衰减幅度较大,使常规电类检测方法不能完成局部放电检测与故障诊断。本研究基于臭氧对253.7 nm紫外光的吸收性提出了一种泵吸式臭氧浓度检测与AE局部放电相结合的技术,对穿墙套管内局部放电源的放电类型及放电程度进行定性、定位分析。结果表明:泵吸式臭氧浓度检测方法在开关柜穿墙套管内部异常放电定性与定位方面具有一定的有效性。 相似文献
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带电检测是判断高压电气设备内部绝缘性能的重要手段之一,特高频局部放电检测技术可以实现由绝缘缺陷引起其内部局部放电源放电类型的诊断及定位。采用粒子群优化算法求解不同时间段局部放电源所在位置,建立三维空间模型,采用粒子群优化算法优化定位初值,降低电气设备特高频局部放电定位精度对到达时间差法时延的依懒性。试验证明带电检测过程中对特高频局部放电定位采用粒子群优化算法求解与优化可以将外界环境对到达时间差算法的时延干扰降至最低,提高定位精度与定位速率,适用于高压电气设备内部局部放电的带电检测。 相似文献