表达牛肉风味强化肽P.postoris GS115（pGAP9-16BMP）摇瓶发酵条件的优化

从碳源种类及质量浓度、氮源质量浓度、温度、pH等方面对构建的工程菌P.postoris GS115（pGAP9-16BMP）摇瓶发酵条件进行了优化.结果表明,最佳表达条件为：甘油30 g/L,蛋白胨40 g/L,酵母粉20 g/L,挡板三角瓶装液量为30%,菌体生长阶段控制温度32℃,初始pH 6.0,培养96 h.在此条件下,牛肉风味强化肽BMP（Beefy Meaty Peptide）表达量最高为41.9 mg/L.     

基因剂量与溶氧对毕赤酵母工程菌发酵产BMP的影响研究

在Pichia pastoris表达系统中,研究了基因拷贝数、甘油补料周期和甲醇流加策略对BMP表达的影响,表明整合有16拷贝BMP基因的工程菌P.pastorisGS115-16B2表达量最高,优化后的发酵条件是:甘油补料周期为4h,采用限制性流加甲醇策略,将溶氧控制在10%~25%之间,诱导72h时,最大菌体密度OD600达到216,此时BMP的表达量为142.42mg/L。     

毕赤酵母表达风味强化肽的分离与纯化

为了开发新型风味强化剂,采用硫酸铵分段盐析法、中空纤维超滤、阴离子交换树脂分离等方法,对构建的工程菌P.postoris GS115—16B2发酵表达的16拷贝风味强化肽的分离纯化效果进行研究．实验结果表明,分离纯化最佳方法为：首先使用中空纤维进行超滤浓缩,经过两次稀释过滤浓缩后的浓缩液再采用离子交换树脂DEAE-52进一步分离纯化．经SDS—PAGE检测,纯化后16拷贝风味强化肽的平均纯度可达93．19％．