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目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。 相似文献
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应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体 总被引:4,自引:2,他引:2
用3.5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞,结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞,在1%人血清培养液中添加适当营养成分,可达到10%小牛血清浓度下的细胞浓度(1.5×106/ml)和单抗产量(大于50μg/ml)。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养,建立了中试培养工艺流程和质控点,收获时细胞浓度为1.0×106~1.5×106/ml,单抗产量为40~70μg/ml,平均日产单抗达1g。在3.5L、14L、75L逐级放大培养过程中,细胞支原体为阴性,收获上清中单抗免疫活性合格,热原试验合格。 相似文献
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为了满足对单克隆抗体的需要,我们应用小型发酵罐对杂交瘤细胞进行了培养试验,并对可能影响细胞生长和抗体产生的因素作了初步探讨。同时还对降低血清含量对培养杂交瘤细胞的影响进行了试验。结果表明,3株细胞在发酵罐中生长良好。细胞最大密度达8×10~2/ml以上。培养上清中的抗体滴度接近静止培养水平,其中A_6和A_(11)>10~5,LS_(7.161)>1:64。接种细胞密度、培养时的pH、溶氧等对细胞生长有不同程度的影响。驯化的细胞在发酵罐中逐步降低血清量是可行的。 相似文献
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