地龙粉酶解用酶初步筛选

分别利用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、弹性蛋白酶、木瓜蛋白酶对地龙粉进行酶解,以水解度和对肺腺癌细胞抑制率为指标筛选最佳用酶。利用五种酶对地龙粉进行酶解,同时进行空白实验,采用MTT体外抗肿瘤技术,通过水解度和酶解液对肺腺癌细胞的抑制率筛选最佳用酶。胃蛋白酶和胰凝乳蛋白酶对地龙粉的水解度分别为9.42%、7.95%,且两者的酶解液对肺腺癌细胞A549的抑制率与浓度成负相关;木瓜蛋白酶对地龙粉的水解度最低且酶解液对肺腺癌细胞A549无抑制作用;胰蛋白酶对地龙粉的水解度为17.96%,其酶解液对肺腺癌细胞A549在低浓度下无抑制作用,在1 mg/L时抑制作用达最大,为83.08%;弹性蛋白酶对地龙粉的水解度最大,为30.61%,且其酶解液对肺腺癌细胞A549的抑制作用与浓度成正相关。地龙粉酶解最佳用酶为弹性蛋白酶和胰蛋白酶混合使用。     

基于半仿生及体外抗肿瘤细胞株实验技术对土鳖虫最佳用酶的筛选

以半仿生技术结合体外抗肿瘤细胞实验,筛选出土鳖虫的最佳用酶。方法:以土鳖虫为底物,用胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和弹性蛋白酶进行酶解,同时以不加酶的水提液为对照组,测定每组的水解度,采用MTT法,以对肿瘤细胞株的抑制率为指标,分别对土鳖虫的最佳用酶进行筛选。水解度从高到低的顺序依次为弹性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶和胰凝乳蛋白酶,它们的水解度分别为9.95%、6.76%、4.94%、2.29%;不同酶解液对不同肿瘤细胞抑制效果不同。土鳖虫酶解液对肝癌细胞的最佳用酶是胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胰凝乳蛋白酶;对喉癌细胞的最佳用酶是胰蛋白酶和弹性蛋白酶。胃蛋白酶对两个肿瘤细胞的抑制效果最弱可忽略不计。     

发酵蜣螂粉乙醇提取物抗肿瘤活性研究

目的:研究蜣螂发酵产物经乙醇回流提取对乳腺癌MCF-7细胞、肺腺癌A549细胞的抑制效果。方法:采用新型固体发酵方式对蜣螂粉进行深层加工,再经乙醇回流提取旋蒸后,用MTT法测定不同浓度的发酵蜣螂醇提物对乳腺癌MCF-7细胞和肺腺癌A549细胞的抑制率。结果:发酵蜣螂醇提物对MCF-7和A549具有较好的抑制作用,且作用强度与药物浓度成正比。其IC50分别为1.51和0.94 mg/mL。结论:蜣螂发酵产物醇提物具有一定的抗肿瘤效果,为临床用药提供新思路。     

地胆粉最佳用酶及其酶解物的抗肿瘤作用研究

初步筛选了地胆粉的最佳用酶及通过了MTT法测定酶解产物的抗肿瘤活性。模拟体外胃肠道消化系统以胃蛋白酶、弹性蛋白酶、胰蛋白酶、糜蛋白酶4种蛋白酶进行酶解反应,采用MTT法检测酶解产物对肝癌细胞BEL-7402、乳腺癌细胞MCF-7的抑制效果。结果弹性蛋白酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶的水解度分别为2.84%、13.11%、10.31%,其中胰蛋白酶的酶解液对肝癌细胞BEL-7402的抑制率明显高于对照组,且成剂量依赖性,其他酶解液的抑制作用不显著。胰蛋白酶的酶解液对乳腺癌细胞MCF-7也有一定的抑制作用,其他酶解液无效果。胰蛋白酶是地胆粉抑制肝癌细胞的最佳酶,酶解度与抑制肿瘤细胞生长没有直接关系。     

基于正交实验双指标法优化麻蛇子粉水提工艺

研究了麻蛇子粉中蛋白质和多糖的最佳提取工艺。通过超声水提的方法,以蛋白质和多糖得率为指标,考察提取时间、pH值、料液比对提取物中蛋白和多糖得率的影响。在单因素实验的基础上进行正交实验,得到麻蛇子粉的最佳提取工艺。结果麻蛇子粉中蛋白质和多糖的最佳提取工艺为提取时间30 min,pH=9,料液比1∶40 g/mL,在这个条件下,蛋白质得率为12.48%,多糖得率为0.55%,且综合评分最高。通过双指标优化麻蛇子粉水提工艺,可以同时兼顾蛋白及多糖两种抗肿瘤有效成分,获得具有优良抗肿瘤活性的水提液,可为后续抗肿瘤实验的深入研究提供基础。     

野生与养殖全蝎水提液中化学成分含量及抗病毒作用的对比研究

为了观察比较野生与养殖全蝎冻干粉水提液中主要成分含量及其抗病毒作用,分别采用改良Lowry法测定蛋白质含量,阿利新蓝法测定糖胺聚糖含量,重量法测定醇提物含量,MTT法考察两种全蝎水提成分对HSV、RSV、EV71病毒的抑制作用。结果蛋白质含量、糖胺聚糖含量差异均无统计学意义。两者对病毒的抑制效果比较中,养殖全蝎水提液效果优于野生全蝎。经过两者间几个主要成分含量的比较以及抗病毒抑制作用的比较,野生与养殖全蝎原粉水提液中主要化学成分含量变化不大,但养殖全蝎抗病毒作用优于野生全蝎。     

正交实验法优化地龙粉混合酶酶解工艺

探索了地龙粉混合酶(弹性蛋白酶和胰蛋白酶)酶解最佳工艺。在单因素实验基础上,采取正交实验对地龙粉进行酶解。以酶解时间、酶解温度、pH、加酶量为自变量,以地龙粉水解度为因变量,采用L9(43)正交实验表进行实验。各因素对实验结果影响顺序为:CBDA。最佳酶解工艺条件为酶解时间8h,酶解温度55℃,pH=8,加酶量3 000 U,水解度达52.96%。     

全蝎白术白头翁组合发酵品不同醇浓度提取物的活性成分分析及体外药理研究

评价全蝎白术白头翁组合发酵品(SAPZFP)不同醇浓度提取物的活性成分含量及体外抗肿瘤活性差异。分别测定SAPZFP不同醇浓度提取物的醇溶性总蛋白、总多糖、总黄酮的含量,并采用MTT法检测不同醇浓度提取物抑制肿瘤细胞体外增殖的能力。SAPZFP不同醇浓度提取物均具有体外抗肿瘤活性,其中75%醇提物抑制乳腺癌细胞株MCF-7、肺腺癌细胞株A549体外增殖的能力最强,IC50分别为0.066、0.022 mg·mL-1。综上所述,SAPZFP的25%、50%、75%醇提物均具有体外抗肿瘤活性,且75%醇提物效果最优。     

烟台刺参酶解工艺最佳用酶初筛及体外抗肿瘤研究

通过考察不同酶对海参酶解产物的体外抗肿瘤活性及水解度的影响,确定最佳用酶,为海参抗肿瘤研究提供新思路。以海参水提液及100μg/mL顺铂为对照组,对比不同提取条件下海参水提液对喉癌Hep-2细胞的增殖抑制率,结合茚三酮显色法测定海参酶解液水解度,确定最佳用酶。结果显示:弹性蛋白酶、胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶处理组水解度分别为10.05%、7.86%、1.54%,其IC_(50)分别为0.642、0.763、0.917 mg/mL,胃蛋白酶处理组水解度为2.72%,抗肿瘤效果极差。说明海参酶解最佳用酶为弹性蛋白酶,其次是胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶。