丝状支原体丝状亚种SC型LppB基因的克隆与表达纯化

目的克隆丝状支原体丝状亚种SC型(MmmSC)LppB蛋白基因,并进行表达及纯化。方法通过PCR,扩增MmmSC标准株PG1的LppB全基因,克隆至pMD18-T载体上,并测序鉴定。同时选LppB基因中两个TGA之间903bp片段,与pET30a载体构建重组质粒,进行诱导表达,表达产物经Ni-NTA-His系统纯化。结果PCR扩增的LppB基因长度片段约1869bp,与预期大小相符。将其与NCBI上发布的Afade株、LC型代表株Y-goat和同属的Bovine7株的LppB基因序列相比较,同源性分别为99·8%、92·8%和76·7%,氨基酸同源性分别为99·2%、90·2%和67·0%。经Ni-NTA-His系统纯化,得到纯净的单一蛋白。结论已成功克隆了PG1的LppB蛋白基因,并进行了表达及纯化。     

丝状支原体丝状亚种SC型LppQ N-端基因表达与免疫原性

目的构建丝状支原体丝状亚种SC型LppQN端基因表达载体,并进行表达产物的纯化及免疫原性检测。方法利用PCR方法在体外定点突变丝状支原体丝状亚种SC型HVRIX株编码色氨酸的基因(TGA突变为TGG),构建表达载体,使其能在大肠杆菌中大量表达,并对表达产物进行纯化和免疫原性检测。结果表达产物约占菌体总蛋白的53.7%,经Westernblot和ELISA检测,表达蛋白具有良好的免疫原性。结论已成功表达了具有免疫原性的LppQ重组表达蛋白,可以作为诊断抗原用于血清学检测。