西尼罗病毒E蛋白在杆状病毒/昆虫细胞表达系统中的表达及其鉴定

目的利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统表达西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)囊膜E蛋白,并进行鉴定。方法利用分子克隆技术将WNV E基因克隆至杆状病毒供体质粒p Fast Bac1中,构建重组供体质粒p Fast Bac-E,转化大肠埃希菌DH10Bac,构建重组穿梭质粒Bac-E,转染sf9细胞,收获含WNV E基因的重组杆状病毒Ac MNPV-E,采用间接免疫荧光及Western blot法检测E蛋白的表达。结果重组供体质粒p Fast Bac-E经PCR及双酶切鉴定证明构建正确,重组穿梭质粒Bac-E经PCR鉴定证明构建正确,转染约96 h后,sf9细胞体积变大、变圆,细胞颗粒化,进而从培养板上脱落,漂浮,收获的第1代Ac MNPV-E经PCR鉴定为阳性。感染重组杆状病毒Ac MNPV-E的sf9细胞周围出现绿色荧光,表达的目的蛋白可与兔抗WNV E蛋白多克隆抗体及鼠抗His单克隆抗体特异性结合,在相对分子质量约53 000处可见目的蛋白条带。结论利用杆状病毒/昆虫细胞表达系统成功表达了WNV E蛋白,为WNV快速诊断方法及新型疫苗的建立奠定了基础。     

莱菔子多糖的提取及分离纯化研究现状

莱菔子作为祖国传统资源及药食同源物质．在我国有着悠久的使用历史和广泛的来源。莱菔子具有诸多保健功能．其中部分功能与其多糖组分有关。因此，研究莱菔子多糖的提取、分离纯化、结构及其功能特性，对深入研究和利用我国传统资源，开发新型功能保健食品，用以预防和治疗疾病．有重要的意义。本文对莱菔子多糖的提取及分离纯化研究现状综述如下。     

新型狂犬病病毒中和抗体检测方法的建立

目的建立一种安全、快速、经济的新型狂犬病病毒中和抗体的检测方法。方法在狂犬病病毒弱毒株HEP-Flury基因组Ψ区插入增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein eGFP)基因,利用反向遗传技术,拯救重组病毒rHEP-eGFP,分别采用荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定及电镜观察等方法对rHEP-eGFP病毒进行鉴定;分别绘制rHEP-eGFP和亲本毒株HEP-Flury的生长动力学曲线;将rHEP-eGFP在BHK-21细胞中连续传代9次,测定各代次rHEP-eGFP的滴度,荧光显微镜下观察eGFP的表达;采用TCID50法检测狂犬病病毒标准攻击毒株CVS-11和rHEP-eGFP的毒力;以rHEP-eGFP病毒为抗原,建立新型荧光抗体病毒中和试验(fluorescent antibodyvirus neutralization,FAVN)-eGFP,对25份犬血清的抗体效价进行测定,并与标准FAVN检测结果进行比较。结果经荧光显微镜观察、直接免疫荧光染色鉴定和电镜观察表明,成功拯救出rHEP-eGFP病毒;重组病毒rHEP-eGFP与亲本病毒HEP-Flury的生长特性相似;rHEP-eGFP连续传代9次,均能稳定表达eGFP;CVS-11的毒力为108TCID50/ml,rHEP-eGFP的毒力为107.3TCID50/ml;FAVN-eGFP与FAVN测定25份犬血清抗体效价的结果具有良好的一致性。结论建立的新型狂犬病病毒中和抗体检测方法(FAVN-eGFP)准确度高,特异性好。     

超音速电弧熔化气雾化CuAg10粉末的特性

利用超音速电弧熔化气雾化法制备了CuAg10合金粉末,对合金粉末的组织结构、粒度分布特征、X射线衍射特性、晶格常数及形貌特征等进行了系统研究.结果表明:粉末组织为二次枝晶臂间距很小的枝晶,雾化时的冷却速度达105K/s;合金粉末粒度均匀细小,形状多为球形、类球状, 平均尺寸为44μm;在雾化过程中形成了过饱和(Cu)和(Ag).     

裂谷热研究进展

裂谷热(Rift Valley fever,RVF)是由裂谷热病毒(Rift Valley fever virus,RVFV)引起的发热性人兽共患病,该病导致反刍动物的大面积死亡及人类的致命性出血热。RVF最初仅流行于非洲东部地区,现正在逐步扩大。2016年我国确诊首例输入性病例,提示非流行地区和国家正在面临威胁。RVF的流行不仅严重影响人类的健康及畜牧业的发展,更可能被用作潜在生物战剂,因此被世界动物卫生组织列为必须报告疫情。本文对RVF的流行病学、分子生物学、检测技术及疫苗研究进展等方面进行简要综述,为今后RVF的相关研究提供参考。     

莱菔子多糖在水果保鲜中的应用初探

采用莱菔子多糖作为涂膜保鲜剂.在常温(25±2℃)条件下,分别以2、4.6、8g/L对苹果、樱桃番茄进行涂膜保鲜处理.测定了在贮藏过程中苹果、樱桃番茄的失重率、总糖、感官等理化性能指标.实验表明,莱菔子多糖能抑制苹果、樱桃番茄体内营养物质的消耗,降低失水率,延缓果实的衰老过程,且6g/L的莱菔子多糖对两种水果的保鲜效果最好.     

马抗中东呼吸综合征冠状病毒特异性F(ab’)_2的制备

目的采用免疫亲和层析技术纯化制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒(Middle East respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)特异性IgG与F(ab’)_2。方法以经MERS-Co V病毒样颗粒(virus-like particles,VLPs)对马匹进行多次免疫所制备的高免血清为原料,原核表达的MERS-CoV刺突蛋白S受体结合域(S-receptor binding domain,S-RBD)为抗原蛋白制备免疫亲和柱,提取制备抗原特异性IgG或F(ab’)_2。间接ELISA法检测各样品的活性,MERS假病毒中和试验检测样品的中和活性,BCA法测定样品的浓度,并计算收率。结果所制备的特异性IgG与特异性F(ab’)2的纯度分别为90. 1%和92. 8%,收率分别为8. 7%和3. 07%;在相同的浓度下,所制备的特异性IgG或F(ab’)_2的活性和中和活性均高于对照组中的血清总Ig G或总F(ab’)_2。结论成功制备了马抗MERS-CoV特异性IgG或F(ab’)_2,为建立更加安全与高效的抗MERS-CoV免疫球蛋白F(ab’)_2制备工艺奠定了基础。     

西方马脑炎病毒E2基因的克隆与原核表达

目的克隆并原核表达西方马脑炎病毒(Western equine encephalomyelitis virus,WEEV)E2基因。方法采用PCR法从重组质粒pVL1393-C-E中扩增E2基因,插入原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-E2,转化E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot进行鉴定。结果重组表达质粒pET-30a(+)-E2经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为52 900,诱导6 h目的蛋白的表达量较高,约占菌体总蛋白的23.5%,重组蛋白主要以包涵体形式存在,可与鼠源His单克隆抗体特异性结合。结论克隆并原核表达了WEEV E2基因,为E2蛋白免疫原性及WEEV亚单位疫苗的研究奠定了基础。     

BHK-21细胞悬浮培养狂犬病病毒(rCVS-11-dG株)工艺的建立及病毒免疫原性评价

目的 优化生物反应器悬浮批次培养狂犬病病毒(rCVS-11-dG株)工艺,制备灭活免疫原,并检测其免疫原性.方法 摇瓶培养BHK-21细胞,优化rCVS-11-dG株病毒培养温度、接种MOI及接毒时初始细胞密度等病毒培养条件,使病毒与细胞相互适应,提高病毒滴度,为生物反应器培养病毒提供参数.在5L体积的生物反应器中,低...     

微生物生物活性物质开发应用进展

微生物能够通过次级代谢产生很多有益的活性物质。微生物资源非常丰富，存在着很大的开发潜力。现就近年来微生物开发应用领域作一综述。