WuT3无血清培养上清中单克隆抗体纯化工艺的建立

目的对WuT3杂交瘤细胞生物反应器无血清培养上清中单克隆抗体进行分离纯化,建立中试分离纯化工艺。方法采用两步离子交换层析法结合硫酸铵盐析法分离纯化WuT3单抗。在通过小量试验优化纯化参数后,进行中量试验和中试放大。结果建立的纯化方法可以放大到中试规模,每批投料30000ml培养上清,可收获单抗达1.5g,单抗总回收率大于60%。经分离纯化后,单抗IgG纯度大于95%,采用免疫荧光法检测抗体活性合格。结论建立了一条生物反应器无血清培养杂交瘤细胞大规模分离纯化单抗的工艺路线。     

首批Vero细胞蛋白质标准品的研制

目的制备首批Vero细胞蛋白质国家标准品,用于人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主残留量检测。方法采用Vero细胞分泌蛋白质为原料,加入蔗糖冻干制成Vero细胞蛋白质国家标准品。本标准品的赋值由两步完成:第一步采用Lowry法对Vero细胞蛋白质标准品原液进行蛋白含量测定;第二步采用酶联免疫法以Vero细胞蛋白质标准品原液绘制标准曲线对标准品进行蛋白含量赋值。随机选取16支蛋白质标准品,测定pH值,采用方差分析统计检验其均匀性;随机选取标准品,分别在不同温度(4、25、37℃)下放置不同时间(1、2、3和4周),各时间点取3支,酶联免疫法检测抗原含量,采用方差分析统计检验其稳定性。结果经协作标定,Vero细胞蛋白质标准品的标示量为2.6μg/mL,标准偏差为0.4,95%可信区间为2.51～2.78μg/mL。该批标准品的均匀性及稳定性良好。结论目前该Vero细胞蛋白质标准品已获批使用,批号为250022-201901,该标准品的建立,对提高人用狂犬病疫苗的质量控制具有重要意义。     

应用生物反应器大规模培养杂交瘤细胞生产体内治疗用WuT3单克隆抗体

用3．5L和14L生物反应器培养WUT3杂交瘤细胞,结果表明用人血清可以代替牛血清培养WuT3细胞,在1％人血清培养液中添加适当营养成分,可达到10％小牛血清浓度下的细胞浓度（1．5×106／ml）和单抗产量（大于50μg／ml）。放大到75L生物反应器中采用半连续方式培养,建立了中试培养工艺流程和质控点,收获时细胞浓度为1.0×106～1．5×106／ml,单抗产量为40～70μg／ml,平均日产单抗达1g。在3．5L、14L、75L逐级放大培养过程中,细胞支原体为阴性,收获上清中单抗免疫活性合格,热原试验合格。     

大规模提取体内治疗用单克隆抗体的工艺

用两步法从WuT3细胞培养上清中提取WuT3单克隆抗体（McAb）,首先将培养上清直接上SP离子交换柱,再上DEAE柱,获取提纯的McAb。该工艺的确定及放大均在Pharmacia产Biopilot中试纯化系统上进行。一次投料20L,纯化规模达2g,纯化的McAb经SDS－PAGE测定,纯度基本达到95％,免疫荧光活性为66±9％。热原质合格,支原体、残余DNA均为阴性,达到体内制剂质控要求。     

添加Cr对Cu50Zr42Al8合金非晶形成能力、热稳定性及耐腐蚀性能的影响

在水冷铜坩埚中采用铜模吸铸法制备了直径为3mm的（Cu50Zr42Al8）100-x（Cr）x（x=0,1,2,3,4）舍金圃棒。采用X射线衍射（XRD）和差分扫描量热（DSC）分别对合金的结构和非晶形成能力进行了研究。结果表明,Cu50Zr42Al8和（Cu50Zr42Al8）99（Cr）。为完全非晶合金,（Cu560Zr42Al8）99（Cr）1具有最高的过冷液相区和最大的热稳定性。通过对非晶合金（Cu50Zr42Al8）99（Cr）1和Cu50Zr42Al8在3．5％NaCl溶液中的腐蚀行为的研究表明,舍微量Cr的Cu基块状非晶合金比不舍Cr的具有更好的耐腐蚀性能。     

重组人睫状神经营养因子的纯化

目的纯化重组人睫状神经营养因子(rhCNTF)。方法破菌液上清经硫酸铵分级沉淀和G-25脱盐后,用QSepharose FF阴离子交换层析初纯,再经Superdex 75 prepgrade凝胶过滤精制,并对纯化产物进行各项检测。结果纯化的rhC-NTF纯度达95%以上,蛋白浓度约为2mg/ml,收率约30%,相对分子质量21600,等电点为6.15,与理论值相符合。Western blot检测证明纯化蛋白能够与特异性抗体结合,并能够明显刺激鸡胚背根神经节突触生长。结论采用盐析、离子交换、凝胶过滤等方法有机组合,成功分离纯化了rhCNTF蛋白。     

首批Vero细胞蛋白质对照品的研制

目的建立首批Vero细胞蛋白质国家对照品,用于人用狂犬病疫苗Vero细胞宿主蛋白残留量检测试验的验证。方法本对照品系采用狂犬病病毒固定株接种Vero细胞,经培养、收获、浓缩、灭活病毒、纯化后,加入适量的人血白蛋白、右旋糖酐40冻干制成。本对照品蛋白含量溯源于Vero细胞蛋白质标准品(250022-201901),应用Vero细胞分泌型蛋白检测试剂盒(ELISA)对其进行标定后赋值。随机选取16支标准品,测定其pH值,采用方差分析统计检验均匀性;随机选取对照品,分别在4、25和37℃放置不同时间(1、2、3和4周),不同时间点取3支,以Vero细胞蛋白质标准品(250022-201901)绘制标准曲线,ELISA法测定蛋白含量,采用方差分析统计检验稳定性。结果经协作标定,本对照品标示量值为7.7μg/mL,参考范围为(7.7±3.6)μg/mL,均匀性及稳定性良好。结论Vero细胞蛋白质对照品已获批使用,批号为250023-201901,该对照品的建立,对加强人用狂犬病疫苗的质量控制具有重要意义。     

不锈钢高效氩弧焊焊剂的研制

针对 30 4不锈钢的焊接研制了一种A TIG焊活性剂。该活性剂由B2 O3、MnO、Fe2 O3、Al2 O3、SiO2 、TiO2 、Cr2 O3、NaF等组成。分析了各单一活性剂对焊接熔深的影响规律 ,在此基础上结合 30 4不锈钢的合金元素系统 ,初步确定了活性剂的基本成分。利用正交试验得出了各组元含量变化对焊接熔深的影响规律 ,所得到的配方可使焊接熔深增加 2倍多 ,可将 8mm厚不锈钢钢板直边坡口对接一次焊透。焊接接头的金相组织 ,焊缝的化学成分 ,焊接接头的力学性能和抗晶间腐蚀性能均能满足相关的要求     

治疗用抗HFRS病毒单克隆抗体质量分析

为了对治疗用抗ＨＦＲＳ病毒单克隆抗体３批中试产品进行全面的质量分析,我们参照国家药品监督管理局颁布的《人用鼠源性单克隆抗体制造及检定规程》进行检定。结果所有指标均合格,其中单抗纯度＞９５％,单抗体单体纯度＞９５％,残余骨髓瘤细胞（ＳＰ２／０）ＤＮＡ含量＜１００ｐｇ／剂量,采用微量细胞培养中和试验检测抗体中和效价＞１：１２８００～１：２５６００,无菌试验、异常毒性试验、鼠源性病毒检测、支原体检测、热原质试验均合格。在自检合格的基础上,送中国药品生物制品检定所检定合格。表明所制备的抗ＨＦＲＳ病毒单克…     

微量组分Ni对Cu50Zr42Al8块状非晶的玻璃形成能力、热稳定性及耐腐蚀性能的影响

通过对块状非晶（Cu50Zr42Al8）。Nix（x=0，1，2，3，4）进行X射线衍射（XRD）和差分扫描量热（DSC）的测试分析，并利用减重法测试（Cu50ZrAl8）99Ni1和Cu50Zr42Al8非晶合金在3．5％NaCl溶液中的腐蚀行为，研究添加微量元素Ni对Cu50Zr42Al8块状非晶的玻璃形成能力、热稳定性及耐腐蚀性能的影响。结果表明：当Ni含量由x=0增加到x=1时，试样均为完全非晶结构，热稳定性增强，但玻璃形成能力有所降低。随着Ni含量的进一步增加，出现了非晶和晶体的复合体。失重测试表明，含微量Ni后Cu基块状非晶的耐腐蚀性能增强。