北京市朝阳区单核细胞增生李斯特菌关键毒力基因缺失与致病性关联性研究

目的 了解北京市朝阳区2016-2018年81株单核细胞增生李斯特菌(单增李斯特菌)关键毒力基因缺失与菌株致病性和血清型的关联性.方法 聚合酶链反应(PCR)结合血清凝集法进行血清学分型;PCR法检测11种毒力基因;微量肉汤稀释法进行药敏实验;结合流行病学调查数据,研究单增李斯特菌关键毒力基因缺失与致病性、血清型的关联...     

柠檬酸杆菌属基质辅助激光解析电离飞行时间质谱图谱库的扩展及效果评价

目的 扩展基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)中柠檬酸杆菌属数据库。方法 PCR方法扩增并测序管家基因leuS进行系统发育分析鉴定菌种；平行对照试验优化菌株培养和样品制备条件；按照自建库方法手动采集优化培养后菌株谱图,构建实验室内部数据库,并进行灵敏度与特异度评价。结果 经系统发育分析,有7个种共66株柠檬酸杆菌。优化条件为哥伦比亚血平板做培养基、转种1次、培养24 h,甲酸溶液体积25 μl。新增沃克曼氏柠檬酸杆菌与C.pasteurii2个菌种谱图,补充中国株弗氏、布氏、吉氏、杨氏、无丙二酸柠檬酸杆菌等5个菌种本地区谱图；结论 leuS基因可以有效区分柠檬酸杆菌属菌种,MALDI-TOF 图谱库的扩展提升了质谱对本地区柠檬酸杆菌属菌种鉴定准确性。     

2009—2020年北京市朝阳区113株食源性金黄色葡萄球菌耐甲氧西林和肠毒素/类肠毒素基因携带与分子分型分析

目的 了解北京市朝阳区2009—2020年113株食源性金黄色葡萄球菌甲氧西林耐药、肠毒素/类肠毒素基因携带和分子分型情况.方法 采用纸片扩散法进行头孢西丁药物敏感性实验,结合mecA基因扩增鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)...     

居民冰箱食源性致病菌病原学分析

摘 要： 目的 了解北京市朝阳区居民冰箱卫生状况及食源性致病菌耐药与毒力分析。 方法 采集居民冰箱拭子进行大肠菌群、葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌 、小肠结肠炎耶尔森氏菌分离鉴定;分离菌株采用微量肉汤稀释法、纸片法及PCR法进行耐药及毒力研究。 结果 120件棉签拭子,大肠菌群、葡萄球菌阳性率48.33%（58/120）、49.17%（59/120）,金黄色葡萄球菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌阳性率2.50%（3/120）、1.67%（2/120）,未检出单核细胞增生李斯特氏菌。金黄色葡萄球菌红霉素耐药率33.33%（1/3）;凝固酶阴性葡萄球菌青霉素、红霉素耐药率23.21%（13/56）、21.43%（12/56）。小肠结肠耶尔森氏菌头孢唑林耐药率50%（1/2）。金黄色葡萄球菌毒力基因seb阳性率66.67%（2/3）,sea、sec、sed、see与耐药基因mecA、vanA阴性;凝固酶阴性葡萄球菌mecA阳性率1.69%（1/59）,sea、seb、sec、sed、see、vanA阴性。小肠结肠炎耶尔森氏菌毒力基因ail、ystA、virF、yadA阴性,ystB阳性。 结论 北京市朝阳区居民冰箱卫生状况差,存在食源性疾病传播风险,应加强冰箱正确使用宣传教育。     

金黄色葡萄球菌肠毒素与多位点序列分型分子分型研究进展

金黄色葡萄球菌是引起临床疾病、社区感染和食物中毒的常见革兰氏阳性菌;肠毒素是参与金黄色葡萄球菌引起食物中毒、猩红热、全身感染等疾病的重要毒力因子;目前已发现27种金黄色葡萄球菌肠毒素/类肠毒素,不同来源金黄色葡萄球菌携带肠毒素/类肠毒素存在差异;多位点序列分型(MLST) 是一门新兴的基于细菌多个管家基因位点差异性分析、可长期监测细菌遗传进化趋势的分子分型技术;截至2021年初MLST已建立128种细菌的分型数据库,金黄色葡萄球菌数据库中已有6583种分型,金黄色葡萄球菌ST分型存在明显的地区流行性,各地已形成独特优势克隆。目前研究表明金黄色葡萄球菌肠毒素/类肠毒素携带与MLST分型间存在一定的相关性,本文将围绕金黄色葡萄球菌肠毒素/类肠毒素、MLST分型及相关性进行综述。     

人乳头瘤病毒16型L1/E7嵌合基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达

目的克隆人乳头状瘤病毒16型(HPV16)L1/E7嵌合蛋白基因,并在毕赤酵母中表达。方法PCR扩增HPV16L1/E7基因,并克隆至毕赤酵母表达载体pPIC-3·5K和pPIC-9K中,构建含HPV16L1/E7基因的pPIC3·5K-HPV16L1/E7和pPIC9K-HPV16L1/E7重组表达载体,经测序证实插入的外源基因读码框正确后,分别转入GS115和KM71菌株中,筛选阳性转化菌株,经PCR鉴定,甲醇诱导表达HPV16L1/E7嵌合蛋白,经SDS-PAGE和Westernblot鉴定,电镜观察,并经离心法纯化VLPs。结果HPV16L1/E7基因已成功插入pPIC-3·5K和pPIC-9K载体中,共获得6株KM71HPV16L1/E7-pPIC3·5K、5株GS115HPV16L1/E7-pPIC3·5K、1株KM71HPV16L1/E7-pPIC9K和2株GS115HPV16L1/E7-pPIC9K阳性转化菌株,并可表达相对分子质量约为69000的蛋白,与预期值一致。表达量约为0·35~1·04mg/ml。Westernblot显示该蛋白可与抗-HPV16L1蛋白和抗-HPV16E7蛋白的单克隆抗体特异性结合。在透射电镜下可观察到VLPs的形成,其形态与HPV16天然病毒颗粒相似。经纯化的目的蛋白纯度接近100%。结论已成功构建了pPIC3·5K-HPV16L1/E7和pPIC9K-HPV16L1/E7重组表达载体,阳性转化菌株可表达结构与野生型HPV16一致的VLPs。     

北京市朝阳区食物中毒相关金黄色葡萄球菌病原学分析

目的 了解2017年北京市朝阳区11株食物中毒相关金黄色葡萄球耐药性、耐药基因、毒力基因及分子分型。方法 依据GB4789.10-2016对甲、乙饭店留样食品、餐具及厨师手涂抹样品进行金黄色葡萄球菌分离鉴定;荧光定量PCR法检测耐药基因mecA、vanA与毒力基因sea、seb、sec、sed、see;纸片法与微量肉汤稀释法进行药物敏感性试验;脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行溯源分析。结果 甲、乙饭店留样食品、餐具涂抹及厨师手涂抹样品共检出11株金黄色葡萄球菌;耐药基因mecA、vanA与毒力基因sea、seb、sec、sed、see均未检出;青霉素100%耐药,四环素、氯霉素耐药率分别为27.3%、9.09%,未发现耐甲氧西林金黄色葡萄球菌株;PFGE分型显示：甲饭店餐具涂抹菌株、手涂抹菌株、乙饭店所有菌株为3种带型。 结论 甲乙饭店分别为两起由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒事件,皆为携带菌株的厨师污染餐具及食品引起,菌株具有较高耐药性。     

PCR检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因

目的:检测食品中金黄色葡萄球菌肠毒素基因谱携带情况,探讨与食物中毒发病相关的金黄色葡萄球菌基因类型。方法:取食品中检出的金黄色葡萄球菌进行分离培养鉴定,通过PCR技术检测样本18种不同型的肠毒素基因的携带情况,并进行统计学分析。结果:食品中检出的金黄色葡萄球菌肠毒素基因有较高的阳性检出率,主要检出sea、seb、sei、seg、sel、sem、sen等基因,其中sea基因检出率最高,达到77.27%;sei、seg、sem、sen基因具有相关性,检出率为9.09%;seb、sel基因的检出率为4.55%。结论:在食品中主要检出金黄色葡萄球菌肠毒素sea、sei、seg、sem、sen、seb、sel等基因,其中,sei、seg、sem、sen基因的相关性还有待进一步深入研究。