草苁蓉多糖对氧化损伤致血管内皮细胞凋亡相关蛋白表达的影响

该研究探讨草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化损伤致人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）凋亡相关蛋白表达的影响。以叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,t-BHP）损伤HUVEC建立体外凋亡模型,分为正常组、t-BHP组（损伤组）、BRPS组,分别应用细胞增殖毒性检测试剂盒（cell counting kit-8,CCK-8）法和流式细胞术检测细胞存活率和细胞凋亡率,用Western blotting技术检测凋亡相关蛋白胱天蛋白酶原（pro-cysteine aspastic acid-specific protease,Procaspase）、聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase,PARP]、Survivin、p53、核转录因子-кB（nuclear factor-кB,NF-кB）信号通路蛋白以及丝裂原活化蛋白激酶（mitogen activated protein kinase,MAPK）信号通路蛋白活化水平。结果显示,与正常组比较,损伤组HUVEC细胞活力降低50.6%,细胞凋亡率升高41.0%;与损伤组比较,BRPS组HUVEC细胞活力升高16.4%,细胞凋亡率降低了22.2%。此外,t-BHP降低HUVEC细胞的Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP和Survivin蛋白水平,升高Cleaved-PARP、p53、NF-κB、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶（phosphorylated extracellular signalregulated kinase,p-ERK）、磷酸化 c-Jun N 末端激酶（phosphorylated c-Jun N-terminal kinase,p-JNK）、磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶（phosphorylated p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38）蛋白水平。而BRPS升高Procaspase-3、Procaspase-8、Procaspase-9、PARP 和 Survivin 蛋白水平,降低 Cleaved-PARP、p53、NF-кB、p-JNK、p-p38 蛋白水平。研究结果表明,BRPS对t-BHP引起HUVEC凋亡具有抑制作用,其机制可能与JNK、p38及NF-κB调控有关。     

草苁蓉环烯醚萜苷含药血清诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡中PI3K/Akt通路的作用

研究草苁蓉环烯醚萜苷(IGBR)含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞活力与凋亡的影响并探讨其可能作用机制。MTT法检测IGBR含药血清对人肝癌SMMC-7721细胞活力的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白。结果表明,IGBR含药血清可降低人肝癌SMMC-7721细胞活力,诱导细胞凋亡。与对照组比较,5-FU组与IGBR组人肝癌SMMC-7721细胞中Bax蛋白表达增多,而p-Akt和Bcl-2蛋白的表达减少(p<0.05),两组间无明显差异(p>0.05);而总Akt没有明显改变。IGBR含药血清可通过PI3K/Akt信号通路,调节Bcl-2家族成员(Bax和Bcl-2),诱发人肝癌SMMC-7721细胞凋亡。     

草苁蓉多糖对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡的抑制作用

目的：研究草苁蓉多糖（Boschniakia rossica polysaccharides,BRPS）对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡 的抑制作用。方法：利用叔丁基过氧化氢（tert-butyl hydroperoxide,tBHP）损伤人脐静脉血管内皮细胞制备细胞 氧化应激损伤模型,采用四甲基偶氮唑盐（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）比色法检测细胞存 活率,分光光度法检测细胞内丙二醛（malondialdelyde,MDA）水平、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）活力和还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）水平。采用二氯荧光乙酰乙酸盐（dichlorofluorescein diacetate,DCFH-DA）法检测细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）水平,采用JC-1荧光染色法观察 细胞线粒体跨膜电位（mitochondrial membrane potentials,ΔΨm）水平,采用Hoechst染色和原位末端标记（TdTmediated dUTP nick end labeling,TUNEL）法观察细胞凋亡情况。Western blot法检测细胞Bax、Bcl-2、细胞色素c （cytochrome c,Cyt c）、Bid片段（truncated Bid,tBid）、Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9蛋白的表达情况。 结果：BRPS提高tBHP损伤的内皮细胞存活率,降低细胞ROS水平,减少MDA生成,提高SOD活性与GSH水 平,升高ΔΨm水平,抑制细胞凋亡。Western blot结果显示,BRPS降低胞浆Cyt c、线粒体tBid水平,减小细胞 Bax/Bcl-2比值,抑制Caspase-3、Caspase-8和Caspase-9的活化。结论：BRPS对氧化应激所致血管内皮细胞凋亡具有 抑制作用,机制可能与线粒体凋亡途径和死亡受体途径均有关。     

草苁蓉环烯醚萜苷对肝癌细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

观察二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌组织的病理变化，探讨草苁蓉环烯醚萜苷（IGBR）对细胞凋亡和Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。将Wistar大鼠分为对照组、模型组、5-FU组及IGBR组。除对照组，各组大鼠第1天给予200 mg/kg DEN腹腔注射1次，而后给予饮用体积分数0.05%的DEN水溶液；5-FU组大鼠腹腔注射25 mg/kg 5-FU每周3次；IGBR组大鼠灌胃500 mg/kg IGBR每日1次。实验第12、20、28周末，分批处死动物，观察肝脏病理变化及细胞凋亡，免疫组化法检测Bax、Bcl-2蛋白的表达。结果表明，与对照组比较，模型组细胞凋亡显著增加，胞质呈棕黄色，凋亡的肝细胞皱缩、核固缩及核仁消失；与模型组比较，5-FU组与IGBR组凋亡显著增多，差异有统计学意义（P <0.05），但两组间无显著差异（P >0.05）；Bax和Bcl-2阳性细胞主要分布于不典型增生灶和癌灶中，表达于胞浆；与模型组比较，5-FU组和IGBR组Bax表达明显增强，而Bcl-2表达明显减弱，差异有统计学意义（P <0.05），两组间无显著差异（P P>0.05）；模型组、5-FU组与IGBR组中Bax表达和Bcl-2表达均呈负相关（P <0.05）。IGBR可诱导细胞凋亡，抑制肝癌细胞增值，其机制可能与Bax蛋白增多和Bcl-2蛋白减少有关。