正交试验法优化番泻豆荚中番泻苷A、B提取工艺

探索番泻豆荚中番泻苷A、B的最优提取工艺及其稳定性,为扩大药源奠定基础。以番泻豆荚为原料,高效液相色谱法测定番泻苷A、B总含量为试验指标,采用单因素试验结合L_9(3~4)正交试验法优选番泻豆荚中番泻苷A、B的提取参数,并考察优选提取方法所得提取液中番泻苷A、B在不同pH及温度下的稳定性。番泻豆荚番泻苷A、B最佳提取工艺参数为0.5%碳酸氢钠溶液,料液比1︰15 (g/mL),温度70℃,提取2 h,提取2次,在此条件下番泻苷A、B总提取量可达到21.72 mg·g-1;最优提取工艺提取液中番泻苷A、B在不同pH溶剂的稳定性随温度、时间的变化显著,室温下, 24 h内,提取液番泻苷A、B在pH为7.5时较稳定。优化所得工艺经济,可靠,且室温下该提取液中番泻苷A、B稳定,对番泻中番泻苷资源的充分利用提供技术参考价值。     

蛹虫草高产胞外虫草素和虫草多糖的诱变育种

通过诱变获得高产胞外虫草素和虫草多糖的蛹虫草菌株.采用紫外线诱变(UV)、化学诱变(LiCl)、复合诱变(UV-LiCl) 3种方式对蛹虫草孢子进行诱变;发酵检测存活菌株的胞外虫草素和虫草多糖的含量.结果:以胞外虫草素为指标,3种诱变方式的最大正突变率分别为化学突变(29.2％)＞紫外突变(28.6％)＞复合诱变(26.5％);以胞外多糖为指标,最大正突变率分别为紫外诱变(35.7％)＞复合诱变(33.3％)＞化学诱变(27.0％).紫外诱变突变株Z-5-1胞外虫草素产量达0.842g/L,比出发菌株高311％;紫外诱变突变株Z-4-7胞外虫草多糖产量达5.250g/L,比出发菌株高148％.在连续培养5代后,仍具有较好的遗传稳定性.紫外诱变能获得较高的蛹虫草正突变率,同时能获得高产虫草素、虫草多糖的突变株.     

蛹虫草液体种制备及发酵生产菌丝体和虫草菌素工艺优化

为获得蛹虫草液体种制备和液体发酵生产菌丝体和虫草菌素的最佳工艺,以蛹草拟青霉Peacilomyces militarisBCEC07菌株为菌种,通过对接种量(孢子浓度)的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体母种制作效果的影响;通过单因素和正交试验,优化生产虫草菌素各营养因子的最佳种类和配比。结果表明:在1.5×1010孢子数的接种量时制作的母种最适合用于蛹虫草液体发酵产菌丝体和虫草菌素;蔗糖、蛋白胨、MgSO4.7H2O、K2HPO4和NAA是最适合的碳源、氮源、无机盐及生长因子;工艺优化后得出蛹虫草液体发酵产菌丝体的最佳配方为30g/L蔗糖、25g/L蛋白胨、1.5g/L KH2PO4、0.5g/L MgSO4.7H2O和4.0mg/L NAA;产虫草菌素的最佳配方为:30g/L蔗糖、25g/L蛋白胨、1.5g/L KH2PO4、0.5g/L MgSO4.7H2O和3.0mg/L NAA。优化后生物量和虫草菌素总产量分别提高了43.00%(达31.60g/L)和31.60%(达645.12mg/L)。为进一步提高蛹虫草菌丝体及虫草菌素的单位产量提供参考。     

前体及营养物提高蛹虫草虫草菌素产量的研究

研究不同前体及营养物对蛹虫草液体深层发酵产胞外虫草菌素的影响,并优化其促进虫草菌素生产的最佳添加条件。结果表明：添加腺嘌呤、甘氨酸、腺苷、L- 谷氨酰胺4 种前体或营养物能大幅提高蛹虫草液体发酵胞外虫草菌素的产量。两种前体和营养物能够通过协同互补作用提高胞外虫草菌素的产量,而且腺嘌呤的组合添加效果明显高于腺苷组合,特别是1g/L 的腺嘌呤与8g/L 的甘氨酸组合添加胞外虫草菌素产量达到1644.21mg/L,是基础培养基的4.66 倍。不同前体及营养物添加发酵后其核苷类物质的含量表明：80% 的虫草菌素被分泌到发酵液中,蛹虫草整个核苷酸代谢系统是紧密相连的,很多核苷类物质都能直接或间接转化成虫草菌素。     

四种稻瘟病生防菌的筛选及其活性评价

为了探明生防菌对稻瘟病菌的抑制作用,采用平板对峙法初筛、生长速率法复筛,从供试菌株中筛出4种对稻瘟病菌有明显抑制作用的目标生防菌,即解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)D1、嗜麦芽寡养假单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)he41、纺锤形赖氨酸芽孢杆菌(Lysinibacillus fusiformis)he14和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)H3。采用生长速率法测定4种生防菌无菌发酵滤液对稻瘟病菌的抑制作用,并对这4种目标生防菌活性的遗传稳定、耐高温、抗紫外线及耐酸碱的性质进行研究。结果表明,无菌发酵滤液的浓度在0.5%~64%时,对稻瘟病菌的抑制率为13.19%~100%之间。菌株D1、he41、he14、H3经转接培养30次,抑菌活性>86%,其发酵液经121 ℃高温处理后,菌株he14无菌发酵滤液的抑菌率达82%,而菌株D1、he41、H3发酵液经40 ℃处理后对稻瘟病菌则无抑制作用。菌株D1、he41、he14、H3在紫外灯(30 W)下照射6 h后,发酵液抑菌率仍达83%以上,经pH3~11的条件处理后,抑菌率>82%。综上,菌株he14是对稻瘟病具有一定生防作用的潜力菌株,为下一步开发防治稻瘟病的微生物制剂奠定了基础。     

酒糟中耐高温酵母菌的筛选及分类鉴定

从茅台酒酒糟中分离得到12株酵母菌,在37~47℃条件下进行培养观察。用菌落形态、生理生化实验分析鉴定菌株。结果表明,2株酵母菌能在47℃的高温下生长,分别为1号和2号。根据形态特征(菌落、细胞、子囊孢子、假菌丝、掷孢子)和生理生化特征等,初步将1号和2号酵母菌鉴定为球拟酵母属和酒香酵母属。1号和2号菌株在47℃时生长良好,具有一定的研究价值。