水流破碎机破碎VC废菌体制成纳米生物颗粒与应用的研究

Vc废菌体即发酵终了的假单孢菌与蜡质芽孢杆菌,污染环境,影响企业清洁牛产.通过发射扇犁水射流,实现射流对射,切割、破碎微牛物细胞.在众多的水射流对射切割试验中发现:水射流密度与切割所得纳米颗粒人小成正比例关系,其数学表达式为:y=f(x);并创建了放人水分子间距离公式:r放=r0xη等10个数学模型:据此研制出纳米级微生物细胞破碎机.首次提出假单孢菌与蜡质芽饱杆菌破碎的额定冲力(F),将Vc发酵混合废菌制造出纳米生物颗粒,用于Vc发酵生产,取代氮原料,节约粮食,变废为宝,实现循环经济和清洁生产;具有明显的环境、社会经济效益.从而结束了人类历史不能工业化粉碎微观物质的历史,获中国发明专利(专利号:03143321.9).     

奇异变形杆菌疫苗候选抗原的鉴定及其免疫保护效果评价

目的 鉴定奇异变形杆菌疫苗候选抗原,并评价其在小鼠体内的免疫保护效果。方法 采用细菌膜蛋白提取试剂盒提取奇异变形杆菌膜蛋白,进行Western blot检测及质谱分析。化学法合成外膜蛋白F(outer membrane protein F,OmpF)及丝氨酸水解酶（serine hydrolase,SH）两种膜蛋白的编码基因,克隆至载体pET-28a,于E.coli BL21(DE3)诱导表达重组蛋白,进行Western blot检测。重组蛋白通过Ni Sepharose High Performance纯化后,经腿部肌内注射15只雌性昆明小鼠,100μg/（0.2 mL·只）,共免疫3次,间隔2周。末次免疫后15 d,经眶前静脉窦采血,分离血清,间接ELISA法检测特异性抗体水平;经小鼠腹腔接种致死剂量的奇异变形杆菌,接种1个月,观察小鼠存活情况,并计算抗原的免疫保护率。结果 提取的膜蛋白可与奇异变形杆菌免疫小鼠抗血清发生特异性结合,经质谱鉴定与奇异变形杆菌APB87305(OmpF)、WP＿004247605(SH)的同源性为100%。原核表达的重组蛋白OmpF及SH可与奇异变形杆...     

山羊地方性鼻内肿瘤病毒重庆株基因组序列分析

目的分析山羊地方性鼻内肿瘤病毒(enzootic nasal tumor virus,ENTV)重庆株基因组序列。方法对临床病例进行剖检、病理学观察,提取组织总RNA,进行RT-PCR扩增,对获得的ENTV-2基因组序列进行测定及分析。结果鼻内肿瘤在鼻腔后端与鼻甲筛骨黏膜紧密相连,完全阻塞鼻腔,侵入鼻窦,呈灰红色、乳头状,表面覆盖大量透明黏液。肿瘤细胞以管状和乳头状结构排列。拼接出1条长度为7 243 nt的ENTV-2 CQ株基因组序列,约占ENTV-2基因组长度的96. 2%。该序列与四川ENTV-2的同源性,最高大于97%,与山羊内源性逆转录病毒(caprine endogenous retrovirus,CERV)gag(XM_018046415_CERV)的同源性高于98%,与陕西ENTV-2的同源性为91%～92%,与英国ENTV-2(AY197548)的同源性为88%。多序列比对显示,CQ株gag基因有2处多核苷酸插入,这一序列特征与XM_018046415_CERV的gag基因相同。除了AY197548_ENTV-2单独构成Ⅱ群外,ENTV-2在羊反转录病毒进化树中构成Ⅰ群;CQ株与四川ENTV-2构成一分支,与陕西ENTV-2构成另一分支。结论该病例为山羊地方性鼻内肿瘤(enzootic nasal tumor,ENT),提示其病原可能是1株古老ENTV-2毒株,有遗传多样性。     

化脓隐秘杆菌溶血素和铁结合蛋白的抗体应答分析

目的 对化脓隐秘杆菌（Trueperella pyogenes）溶血素（pyolysin,PLO）和铁结合蛋白（iron-binding protein,IBP）的抗体应答情况进行分析。方法 采用腹腔注射途径建立化脓隐秘杆菌小鼠感染模型,观察不同剂量细菌对小鼠的致死性和注射部位形成的组织病变。制备化脓隐秘杆菌灭活抗原,采用肌肉注射途径免疫45只雌性昆明小鼠和10只山羊,每只小鼠0.2 mL,每只山羊1 mL,均进行3次免疫,每次间隔2周,第3次免疫后2周采血分离血清。采用ELISA法测定感染小鼠、健康圈养羔羊、化脓隐秘杆菌灭活抗原免疫小鼠和山羊血清中抗PLO和IBP的IgG抗体水平。结果 注射部位出现化脓和皮肤坏死的小鼠血清中能检出高水平的抗PLO和IBP抗体;无组织病变小鼠血清中仅能检测到低水平的抗IBP抗体;连续注射无组织病变剂量细菌的小鼠血清能检出抗PLO和IBP抗体。圈养羔羊血清抗PLO抗体阳性率高,而抗体水平低。免疫小鼠和山羊血清中均能检出抗IBP抗体,但部分动物检测不出抗PLO抗体。结论 IBP是化脓隐秘杆菌感染和灭活疫苗免疫诱导抗体应答的主要抗原之一,PLO抗体水平具有反...     

山羊化脓隐秘杆菌溶血素抗体间接ELISA检测方法的建立、验证及应用

目的 建立山羊化脓隐秘杆菌溶血素(pyolysin,PLO)抗体的间接ELISA检测方法,并进行验证及应用.方法 通过E coli表达系统表达重组溶血素(recombinant pyolysin,rPLO),采用Ni-NTA亲和层析进行纯化.以rPLO作为包被抗原,HRP标记的兔抗山羊IgG抗体为二抗,建立检测山羊化脓...     

猪圆环病毒2型ORF2与猪繁殖及呼吸综合征病毒ORF5嵌合抗原表位在乳酸乳球菌中的表达

目的乳酸乳球菌中表达猪圆环病毒2型(porcine circovirus type 2,PCV2)ORF2与猪繁殖及呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5的嵌合抗原表位。方法按乳酸乳球菌密码子使用偏好设计并合成PCV2 ORF2及PRRSV ORF5的串联抗原表位基因,插入至乳酸菌表达质粒p NZ8148,构建重组表达质粒,转化乳酸乳球菌NZ9000中,经乳酸菌素(nisin)诱导表达嵌合蛋白,采用Ni-NTA亲和层析纯化,进行12%SDS-PAGE分析。结果重组表达质粒经双酶切鉴定,构建正确。嵌合蛋白相对分子质量约25 000,在乳酸乳球菌中主要以可溶性形式表达,纯化后纯度达96%以上,浓度约1 mg/m L,产量可达60 mg/L细菌培养物。结论 PCV2ORF2与PRRSV ORF5的嵌合抗原表位在乳酸乳球菌中得到高效可溶性表达。