3-甾酮-△^-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△^1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶。能催化3-甾酮化合物在C1.2位处脱氢，提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a，实现了简单节杆菌3-甾酮-△^-脱氢酶在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析．并用分光先度法检测酶的活力。结果表明，表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在。利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白，复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

色褐链霉菌磷脂酶D基因pld的克隆与表达

利用表达载体pET-22b( ),实现了色褐链霉菌磷脂酶D基因在大肠杆菌BL21(DE3)中的高效表达.利用镍亲和柱对表达产物进行纯化,将纯化后的重组磷脂酶D作用于底物卵磷脂和丝氨酸定向合成磷脂酰丝氨酸,并用HPLC法检测酶活力.结果表明,目的蛋白可在短时间内进行大量表达.转酯反应6 h后卵磷脂的转化率达到31%,重组磷脂酶D活力达到39 U·(mg蛋白)-1.     

Rhizopus chinensis 12#发酵产生纤溶酶的分离提纯

分离自南方小酒药的华根霉12#(Rhizopuschinensis12#)以豆粕和麸皮为原料固体发酵可产生多种纤溶活性组分.采用饱和度40%～70%的硫酸铵溶液分步盐析、OctylSepharoseFastFlow疏水层析、Q SepharoseHighPerformance离子交换层析和SephacrylS 100凝胶层析方法对活性组分进行分离提纯,得到电泳纯的纤溶酶.SDS PAGE方法测定该酶相对分子质量为18000,凝胶过滤方法测定相对分子质量为16600,表明该酶由单亚基组成.     

糖化酵母在干啤酒生产中应用的研究（Ⅱ）：原生质体细胞融合法选育高…

本文利用ＰＥＧ诱导原生质细胞融合技术，进行糖化酵母单倍体Ｈ－３（２）－２菌株与优良嗜杀啤酒酵母５－２４菌株的原生质体细胞融合实验。在对融合亲本不做任何遗传标记的情况下，将糖化酵母的糖化酶基因转移到嗜杀啤酒酵母中，获得１株高发酵度嗜杀啤酒酵母Ｆ－３５－８８菌株。     

嗜杀苹果酒酵母的构建

采用核融合缺陷原生质体融合技术 ,将嗜杀质粒供体菌 5 0 45 (α ,his4,kar1— 1[KIL—K1 ]rho+ )中的嗜杀质粒转移到受体菌苹果酒酵母AW中去。用 3 5 %PEG ,3 0℃诱导融合 2 0min ,经嗜杀活性检出、小型酿造实验、遗传稳定性实验、细胞大小及体积的测定、dsRNA质粒的提取及琼脂糖凝胶电泳等实验 ,筛选出 4株遗传性状稳定、具有嗜杀活性且发酵性能良好的融合子F12、F3 0、F5 7、F65。     

糖化酵母在干啤酒生产中应用的研究（Ⅰ）──具有糖化酶活性和去除POF1基因的糖化酵母的选育

比较了多株单、双倍体糖化酵母，选出糖化酶活性及发酵度较高的糖化酵母单倍体──Ｓｏｃ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ２６０６７－４４。同时发现糖化酵母单倍体菌株的酶活性高于二倍体菌株。含有ＰＯＦ１基因的糖化酵母（ｐｏｆ＋表型）可脱羧肉桂酸形成苯乙烯，ｐｏｆ－菌株无此能力。通过气相色谱检测肉桂酸－酒花麦汁发酵液中的苯乙烯含量，可以鉴别出去除ＰＯＦｌ基因的菌株。本文利用酵母菌的群体杂交法，通过Ｓ．ｄｉａｓｔａｔｉｃｕｓ２６０６７－４４与酿酒酵母单倍体杂交，获得１株糖化酶活性及发酵度较高，并且去除了ＰＯＦ１基因的单倍体菌株Ｈ－３（２）－２（ａ，ＳＴＡ，ｐｏｆ－）·     

中空纤维膜过滤法高密度培养凝结芽孢杆菌TQ33

利用中空纤维超滤装置进行TQ3 3高密度培养 ,确定了采用过滤法进行高密度培养的工艺流程和参数。在对数后期 ,当乳酸质量浓度达到 15g/L时 ,开始过滤培养。过滤培养阶段持续 6h ,培养过程中平均过滤速率和培养基的流入速率为 1L/h ,平均稀释率为 0 4/h。对通过试验所确定的工艺进行高密度培养 ,最终菌体和芽孢浓度分别达到 1 6× 10 10 cfu/mL和 1 2× 10 10 cfu/mL ,是分批培养的 2 1倍和 3 7倍     

纳他霉素发酵工艺探讨

通过研究不同温度、不同pH、不同溶解氧、不同接种种龄及接种量对发酵生产纳他霉素的影响,发现生产纳他霉素较佳的发酵条件是:温度29℃,接种量2%,种龄26h,溶解氧30mg/L,pH随发酵的不同阶段而进行控制。     

山楂干酒中还原性物质的分析与还原糖含量测定

用斐林试剂测定山楂酒中还原糖含量为14．2g/L，不符合干酒的还原糖要求。分析表明：半乳糖醛酸在山楂干酒中含有8．10g/L，相当于7．53g／L还原糖，多酚类物质相当于3．7g／L还原糖，是影响还原糖测定的主要还原性物质；山楂干酒中实际还原糖含量为2.97g/L,符合干酒标准。山楂干酒中的还原糖含量可以通过活性炭吸附与HPLC或活性炭与强碱性阴离子交换树脂吸附两种方法进行定量测定。     

利用SAS软件优化丙酮丁醇梭状芽孢杆菌产丁醇的发酵条件

通过单因素优化实验、Plackett-Burman实验和Box-Benhnken响应面实验对影响丙酮丁醇梭状芽孢杆菌产丁醇能力的主要因素进行优化,得到了回归方程:Y_2=8.583 367-0.002 125×X_7-0.416 5×X_8+0.297 567×X_9+0.070 692×X_(10)-0.550 233×X_7~2-0.037 9×X_7×X_8-0.001 775×X_7×X_9-0.053 75×X_7×X_(10) +0.037 529×X_8~2-0.182 675×X_8×X_9+0.032 475×X_8×X_(10)+0.126 754×X_9~2-0.069×X_9×X_(10)- 0.588 208×X_(10)~2。对回归方程进行岭嵴分析,得到了丙酮丁醇梭状芽孢杆菌的优化培养条件,即装液量为310 mL,种龄为18h,静态培养,接种量为6%,温度为37℃,初始pH值5.5,在此基础上进行7L发酵罐扩大培养,优化前和优化后的分批发酵结果相比,优化后7L罐最佳浓度的产量为10.55g/L,比原产量8.02g/L提高了31.25%,比有关文献报道的产量高出11.64%。