腐生丝状嗜热真菌分泌的嗜热纤维素水解酶研究进展

腐生丝状嗜热真菌是微生物中极重要的一个类群,大多数嗜热真菌能在常温及高温条件下生存.腐生丝状嗜热真菌分泌的嗜热酶具有优良的热稳定性以及酶活力,在工业生产中具有广阔的应用前景.本文对腐生丝状嗜热真菌分泌的三种主要嗜热纤维素水解酶在工业方面的应用、分子领域的研究现状予以综述,为嗜热纤维素水解酶在生物技术上的应用提供基础.     

一种快速提取裂殖壶菌基因组DNA的方法

研究建立快速有效提取裂殖壶菌基因组DNA的方法。以裂殖壶菌Schizochytrium sp.FJU-512为试验材料,比较了十六烷基三乙基溴化铵（cetyltriethylammnonium bromide,CTAB）法、十二烷基硫酸钠（Sodium dodecyl sulfate,SDS）法、SDS快速法和裂解法4种DNA提取方法在裂殖壶菌中的提取效果。4种方法均能从裂殖壶菌中提取到长度大约为23Kb的DNA片段,不同的提取方法获得的DNA产量存在明显差异。运用真菌18S rDNA通用引物和β-酮脂-酰基ACP合酶（beta-ketoacyl[ACP]synthase,KS）引物分别PCR扩增均能得到目的片段。结论：CTAB法提取DNA的效率更高、操作步骤快速简单,适用于一次微量提取多个样品的基因组DNA。     

提取及培养条件对紫球藻AA与EPA的影响

研究了紫球藻脂肪酸提取过程中不同的预处理方法(碾磨处理、超声波处理及未预处理)及提取分析方法(KOH-甲醇法、乙醚一石油醚法、氯仿-甲醇法、乙醇法、HCI-甲醇法)对紫球藻二十碳四烯酸与二十碳五烯酸的影响,结果表明,碾磨预处理是紫球藻不饱和脂肪酸二十碳四烯酸(AA)及二十碳五烯酸(EPA)检测效果最好且简便经济的方法,而氯仿-甲醇法对紫球藻AA及EPA的气相色谱(GC)分析效果最优,在同等条件下其灵敏度高,所取得的长链不饱和脂肪酸甲酯的产物多,EPA达到1.159mg/g,AA达到2.062mg/g;其他方法依次按效果排序为:乙醚-石油醚法>乙醇法>KOH-甲醇法>HCI-甲醇法.同时研究了不同培养时间对紫球藻AA与EPA组成的影响,结果表明,对数前期第6d为收获EPA的最佳时间,含量达到10.671mg/g;对数期末第8d为收获AA的最佳时期,含量达到19.41 5mg/g.     

代谢工程在酿酒酵母茵育种中的应用研究进展

酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)是传统的乙醇生产重要菌株,也是第1个完成基因组测序的真核生物。随着世界能源储备的日益枯竭,燃料乙醇作为液体可再生能源的广泛应用,利用生物技术对酿酒酵母进行遗传修饰,改变其代谢网络,构建高产乙醇的转基因酿酒酵母已成为当今酿酒酵母分子育种的热点。针对近年来利用代谢工程拓展酿酒酵母底物利用范围、降低副产物生成率、提高乙醇产量、改良细胞特性以及缩短发酵周期等方面的研究进展予以综述。     

微生物发酵生产DHA的研究进展

DHA(二十二碳六烯酸)是一种对人体重要的长链多不饱和脂肪酸,破囊壶菌科微生物因富含DHA成为当前的研究热点。本文介绍了DHA的微生物来源及其代谢途径,对国内外研究情况进行综述,详细阐述了影响DHA发酵的各种因素,并指出选育高产菌株、代谢途径分析、放大培养及转基因植物是今后工作的方向。     

里氏木霉基因组密码子偏好性研究

在不同物种中,密码子偏好性存在一定程度的差异.为了研究纤维素酶主要工业生产菌株——里氏木霉(Trichoderma reesei)基因组密码子的偏好性,对里氏木霉9352个基因的编码区进行密码子分析.结果显示,里氏木霉97％的基因GC含量为50％～68％,GC3的平均含量为70.4％.中性分析与ENC-plot分析表明...     

侧孢短芽孢杆菌碱性蛋白酶基因BLG4在枯草芽孢杆菌WB600中的高效表达

侧孢短芽孢杆菌G4菌株在侵染线虫的过程中可以分泌蛋白酶,降解线虫体壁,从而帮助细菌侵入宿主体内.在本文中,侧孢短芽孢杆菌的胞外蛋白酶BLG4基因经克隆后插入到改造后的枯草芽孢杆菌表达载体pWT22中,构建重组表达质粒pWT22-BLG4.构建成功的重组质粒通过化学转化法转入枯草芽孢杆菌蛋白酶缺失菌株WB6000中,转化子pWT22-BIG4/WB600在IPTG(1.0 mmol·L-1)的诱导下,发酵液上清中的蛋白酶活可达到620U·mL-1,高于出发菌株G4的BLG4酶活(240 U·mL-1).经SDS-PAGE分析,重组子pWT22-BLG4/WB600产生了一条分子质量约为30ku的条带,该条带的大小与侧孢短芽孢杆菌G4上清发酵液中BLG4条带的大小一致.而未经IPTG诱导的重组子pWT22-BLG4和经IPTG诱导的WB600则未出现该条带.结果证明侧孢短芽孢杆菌G4的碱性蛋白酶基因BLG4已在枯草芽孢杆菌WB600中获得了成功表达.重组蛋白酶具有与侧孢短芽孢杆菌G4产生的BLG4蛋白酶同样的酶学性质.同时,重组蛋白酶具有明显的杀线虫和体壁降解能力,表明其在线虫生物防治中将有广泛的应用前景.