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1.
将dhaT基因片段以顺反子的形式插入到重组质粒pMD19TS2中gldABC基因的下游,形成重组克隆质粒pMD19TS3,进而将gldABC与dhaT基因以多顺反子的形式亚克隆至pET-28a(+)表达载体上。终浓度为1mmol/L IPTG诱导重组大肠杆菌E.coli/pET-28a(+)/gldABC-dhaT 2h,SDS-PAGE电泳分析结果表明分别在甘油脱水酶三个亚基分子量相对应的61ku、21ku、16ku和1,3-丙二醇氧化还原酶亚基分子量相对应的42 ku的位置上出现了特异性条带。上清液中酶活性分别为甘油脱水酶23.7U/mL,1,3-丙二醇氧化还原酶30.4 U/mL。  相似文献   
2.
以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过基因扩增仪(PCR)扩增得到了目的基因(g1dABC)并将该基因克隆到pMD19-T Simple载体。通过对该基因的序列分析,甘油脱水酶(g1dABC)结构基因的全长为2816bp。将限制性内切酶处理后的含有自身核糖体结合位点的dhaT基因插入到质粒pMD19-T Simple/g1dABC中g1dABC基因的下游,形成重组克隆质粒pMD19-T Simple/g1dABC-dhaT,并进一步将g1dABC与dhaT串联基因亚克隆到表达载体pET28a(+)上。  相似文献   
3.
以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组为模板,通过PCR技术成功地扩增了dhaKL基因,并构建了pET-28a(+)/dhaKL表达载体。DNA序列分析的结果表明:dhaKL基因由2个开放阅读框架组成:ORF1全长为1017bp,编码356个氨基酸;ORF2全长633bp,编码210个氨基酸。SDS-PAGE电泳结果表明:dhaKL基因获得了有效表达,上清液中的酶活性为15.6U/mL。  相似文献   
4.
以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了目的基因(dhaT)并将该基因克隆至pMD19-T Simple载体。基因的序列分析表明,dhaT基因全长为1164bp,编码387个氨基酸。将含有自身核糖体结合位点的dhaT基因片段插入到pMD19-T Simple/gldABC质粒的gldABC基因下游,形成重组克隆质粒pMD19-T Simple/gldABC-dhaT,并进一步将gldABC与dhaT串联基因亚克隆到表达载体pET28a(+)上。  相似文献   
5.
从土壤中分离出了一株乳糖酸生产菌株,经鉴定为洋葱假单胞菌。采用NTG诱变,选育出了乳糖酸高产菌株NTG-15-03,并对其发酵条件进行了初步的研究。结果表明:以乳糖10.0%,玉米水解液1.0%,NaCl 0.05%,K_2HPO_40.1%,KH_2PO_4 0.1%,硫酸镁0.05%,pH7.0为培养基,该菌株的乳糖酸产量为92.1g/L。  相似文献   
6.
以肺炎克雷伯氏菌Asl.1736的基因组为模板,通过PCR技术成功地扩增了dhaKL基因,并构建了pET-28a(+)/dhaKL表达载体.DNA序列分析的结果表明:dhaKL基因由2个开放阅读框架组成:ORF1全长为1017bp,编码356个氨基酸;ORF2全长633bp,编码210个氨基酸.SDS-PAGE电泳结果表明:dhaKL基因获得了有效表达,上清液中的酶活性为15.6U/mL.  相似文献   
7.
郑艳  管艺飞  刘长江 《食品科学》2007,28(3):203-205
以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组DNA为模板,通过PCR扩增得到了目的基因(gldABC)并将该基因克隆到pMD19-TSimple载体。通过对该基因的序列分析,甘油脱水酶(gldABC)结构基因的全长为2816bp,由三个独立的开放阅读框架组成,三个独立的读码框分别由1668、585、426bp组成,分别编码556、195、142个氨基酸。通过BLAST同源性分析,该基因与GenBank中已发表的gldABC基因(U60992)的核苷酸序列同源性为99.39%。氨基酸的同源性为100%。  相似文献   
8.
郑艳  管艺飞  刘长江 《食品科学》2008,29(6):222-225
以肺炎克雷伯氏菌As1.1736的基因组为模板,通过PCR技术成功地扩增了dhaD基因,并构建了dhaD和dhaKL基因的共表达载体.序列分析结果表明:dhaD基因全长1104bp,编码367个氨基酸残基.SDS-PAGE电泳结果表明:dhaD和dhaKL基因均获得了有效表达;上清液中酶活性分别为甘油脱氢酶23.2U/ml,二羟丙酮激酶25.6U/ml.  相似文献   
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