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双抗夹心ELISA检测食品中大肠杆菌O157:H7方法研究 总被引:10,自引:0,他引:10
研究获得纯化抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体,经检测10mg/ml纯化IgY抗体的效价为1:320;以大肠杆菌O157:H7免疫新西兰大耳白兔,获得兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体,效价达1:25600。以兔抗大肠杆菌O157:H7IgG抗体稀释3200倍作为捕获抗体,抗大肠杆菌O157:H7IgY抗体为检测抗体建立双抗夹心ELISA方法检测大肠杆菌O157:H7,正交试验分析表明,捕获抗体于37℃包被2h、不封闭、抗原与捕获抗体于37℃结合2h、检测抗体浓度为0.25mg/ml、与抗原于37℃结合1h为最优反应条件。该方法对纯培养菌液检出限为105CFU/ml,具有良好的敏感性及特异性。染菌样品经在EC增菌液中选择性培养后进行双抗夹心ELISA检测,接种量为0.1~1CFU/g(ml)的样品在培养12h后可检出阳性反应,1~10CFU/g(ml)的样品在培养8h后可检出阳性反应。 相似文献
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抗志贺氏菌IgY的提纯及建立间接ELISA检测志贺氏菌 总被引:2,自引:0,他引:2
采用水稀释法提纯抗志贺氏菌IgY,检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320,并以此IgY为基础建立间接ELISA检测志贺氏菌,测定志贺氏菌纯培养液的检出限为105~106cfu/mL。对蜡样芽孢杆菌等10株不同菌株的检测结果表明,该方法对志贺氏菌有明显的检测特异性,对所测定的其它菌株无交叉反应。 相似文献
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抗痢疾志贺氏菌的特异性IgY的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
以痢疾志贺氏菌为抗原免疫产蛋母鸡,从鸡卵黄中提取免疫球蛋白,建立抗痢疾志贺氏菌的特异性IgY的效价检测方法,并研究母鸡的免疫应答性以及抗体的提取方法和体外抑菌效果。研究结果表明:用108cfu/mL和109cfu/mL剂量的抗原分别免疫的鸡的卵黄中,于初次免疫后的第12天出现抗痢疾志贺氏菌IgY,两组效价均为1∶3600。经加强免疫后效价迅速上升,至第48天低剂量免疫组达到最高效价1∶28800;第60天高剂量免疫组达到最高效价1∶57600。低剂量免疫组的效价维持了210d,高剂量免疫组的效价在免疫后360d时仍维持在1∶7200水平。用水稀释法、硫酸铵溶液分级盐析、SephadexG-25凝胶过滤以提取IgY,提纯后IgY的效价翻倍。SDS-PAGE鉴定抗体的纯度,电泳图谱中出现抗体的轻链和重链两条带。体外抑菌实验表明,IgY能抑制痢疾志贺氏菌的生长。 相似文献
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研究获得纯化抗志贺氏菌IgY,经检测10mg/mL纯化抗志贺氏菌IgY的效价为1∶320;以志贺氏菌免疫新西兰大耳白兔,获得抗志贺氏菌的兔抗体,效价可达1∶12800。以此两种抗体建立双抗夹心ELISA,正交试验分析表明,兔抗体包被条件为4℃过夜,采用不封闭,抗原与包被抗体结合条件为37℃、1h;加入检测抗体(IgY)的浓度为0.25mg/mL,其结合条件为37℃、1h。该方法对纯培养菌液检出限为105cfu/mL,具有良好的敏感性;10株其他菌株的检测结果表明,该方法只与志贺氏菌发生特异性反应,不与其他菌株的抗原发生交叉反应。染菌的食品样品经选择性增菌后进行双抗夹心ELISA检测,含0.1~1cfu/mL志贺氏菌的样品在增菌13h后可检出阳性反应,含1~10cfu/mL志贺氏菌的样品在增菌11h后可检出阳性反应。 相似文献
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