黄花烟草K+通道基因NKCl克隆与序列分析

通过已知生物钾通道蛋白保守序列分析,设计兼并引物对钾饥饿处理的烟草幼根总RNA的反转录产物进行PCR扩增,分离到K 通道基因NKCl,该基因的cDNA阅读框由2481个核苷酸组成,编码的蛋白含有826个氨基酸(分子量为94.6KD),等电点为6.60;将核苷酸序列输入NCBI进行BlastX其同源序列大部分为高亲和K 转运体,与该基因同源性最高的是Solanum tuberosum钾通道基因SKT1,其氨基酸同源性为79%,预测该蛋白具有6个跨膜区域,采用同源模建方法预测了NKC蛋白活性区域的3维结构.同时,特异性转录分析发现NKCl基因在烟草幼根、叶片和花各器官均有表达,而以幼根组织中转录量最多;缺钾处理可显著诱导根系中NKC基因的转录,而高浓度NH4 处理对该基因的转录具有抑制作用,证实NKC基因在黄花烟草的钾吸收过程中起着重要作用.     

接头连接PCR步行法鉴定转基因烟草

应用接头连接PCR步行法,建立了分子水平鉴定不同转基因事件的方法和体系;并利用不同转基因事件外源基因与植物基因组DNA整合位点处核酸序列的差异,设计了不同转基因烟草事件的标签引物,成功地对几个转TMV-CP材料进行了鉴定。     

转基因烟草定性检测方法的研究

本文总结多年的试验研究结果,提出了一套较为完善的转基因烟草定性检测技术,应用该技术,能使转基因烟草的检测精确度由常规PCR的0.1%提高到0.005%。该技术在两次CORESTA转基因烟草盲检合作试验及多年的进出口烟叶、卷烟制品的转基因检测工作中得到广泛的验证。      

一株突破va基因型烟草抗性的PVY病毒分离物的鉴定

  背景和目的  近来,能突破va基因型抗性的马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)毒株在烟草上不断出现。2016年,我们分离到一株抗性突破的毒株PVY-CJ,本文对该病毒分离物进行了验证和鉴定。  方法  采用病毒重新接种、多重RT-PCR、RT-PCR分段扩增病毒全长基因组、PVY病毒分子进化分析及病毒蛋白VPg蛋白序列比对等方法对PVY-CJ毒株进行了验证和鉴定。  结果  三种重新接种了PVY-CJ的va基因型烟草品种均发病。多重RT-PCR结果将PVY-CJ鉴定为PVYNTN株系。序列分析表明,PVY-CJ全长基因组包含一个全长9180 nt的开放读框,其编码一个3060 AA的多聚蛋白。分子进化分析进一步验证了其归类于PVYNTN株系。相比其他PVYNTN株系毒株,PVY-CJ的VPg蛋白105位氨基酸出现了一个由赖氨酸到谷氨酸的替换,而这一氨基酸替换导致了其对va基因来源抗性的突破。  结论  我们首次报道并鉴定了国内一株能突破va基因型烟草抗性的PVY毒株—PVY-CJ。这为进一步研制PVY抗病烟草品种提供了材料。      

应用0.3%科生霉素防治烟草赤星病研究

科生霉素可显著抑制赤星病菌孢子萌发，使其丧失萌发能力或产生畸形芽管，并能抑制菌丝生长，早期预防可延迟赤星病发病期１０天左右，病害发生后可有效控制病斑扩展和新病斑的产生，稀释倍数２００倍以内施用三次，防治效果在７０％以上；     

黑龙江省烟草线虫病发生初报

烟草寄生线虫种类较多,其分布和危害程度差异也较大,烟草胞囊线虫病是国外烟草产区的主要病害,烟草根结线虫病在我国华北及江南各省发生也很普遍,在黑龙江省烟区还未见有关烟草寄生线虫病的报道。1991年5月在我省林口县的五林、五星等地发现了烟草苗期寄生性线虫,对烟草造成不同程度的危害。     

马铃薯Y病毒两个黑龙江烟草分离物的全基因组序列分析

为明确黑龙江烟区马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)分子株系和进化特征,从哈尔滨和牡丹江感病烟草采集到Harbin和MDJ两个样品,通过RT-PCR扩增了其全基因组序列,并进行了一致率、重组、系统发育和选择压力等分析。结果表明,2个分离物(GenBank登录号分别为MH933741和MH933742)基因组全长均为9699核苷酸。Harbin与MDJ和比利时分离物GBVC 26(JQ969039)一致率最高,为98.5%;MDJ与Harbin和GBVC 26一致率最高,为98.5%。Harbin是美国分离物Oz和瑞士分离物N-605的重组体,MDJ是美国分离物CW和N-605的重组体。利用全基因组序列构建的系统进化树显示,PVY分离物分为9个组,Harbin和MDJ均属PVYN-Wi组。PVY的11个基因均处于负选择,其中NIa蛋白基因的选择压力最大。      

蒙古灰象甲危害烤烟

1993年5月8日至23日,黑龙江省肇源县的福兴、福强、新站等乡镇发生蒙古灰象甲危害烤烟的现象,受害面积几百亩。这次危害,虫口密度在每株8～30只左右。所不同的是夜间危害烟苗,白天潜伏于土壤中。干旱、无地膜的烟田比湿润、覆膜的烟     

烟草灰霉病侵染条件的研究

烟草灰霉病是黑龙江烟区新发现病害，个别地块已造成严重损失。自１９９０～１９９５年利用田间试验和控制条件接种方法，研究了烟草灰霉病病菌侵染来源和侵染规律，试验发现：①灰霉病菌Ｂｏｔｒｙｔｉｓｃｉｎｅｒｅａ侵染烟株的最适宜温度在１８℃左右，９℃以下或２７℃以上不能发生侵染，该菌发生侵染还必须满足９ｈ以上的湿润时间，１２～２４ｈ持续湿润利于侵染，光照对病菌侵染有抑制作用。②病菌的侵染来源主要是来自烟株病残体产生的分生孢子。③黑龙江烟区有两个侵染高峰，一个在６月中、下旬，另一个在８月中、下旬。这期间低温、多雨侵染率较高。