利用微生物转化丙烯腈成丙烯酰胺的研究Ⅰ.产腈水合酶菌种的分离筛选和鉴定

用富集培养法在含腈的培养基中对111个试样分离得到1237株利用腈的菌株,从中选出了一株能转化丙烯腈成丙烯酰胺的优良菌株JP-1。经鉴定,按Bergey's《细菌鉴定手册》(第八版)定名为恶臭假单胞杆菌(Pseudomonas putida)。反应上清液经冷冻干燥,甲醇抽提及真空蒸发后得到白色结晶。经色质联用证明该菌株转化生成的产物确系丙烯酰胺。     

利用微生物转化丙烯腈成丙烯酰胺的研究Ⅱ、产腈水合酶菌种的发酵条件的研究

对恶臭假单胞杆菌(Pseudomonas putida)JP-1产酶条件进行了研究。结果表明,腈水合酶为诱导酶.该菌株能利用丙腈作唯一的碳、氮源,附加碳源对产酶没有促进作用,但附加玉米浆对产酶则有明显的促进作用.丙腈和丙酰胺是腈水合酶的有效诱导物.Co~( 2)对产酶有明显抑制作用,其它金属离子对产酶无促进作用,JP-1菌产酶最适培养基组成为(%);玉米浆0,15,丙腈0,25(V/V),K_2HPO_4·3H_2O 0.2,NaCl 0.1,MgSO_4·7H_2O 0.02,微量元素0.1(V/V).在pH7.0和28℃条件下培养48h后测得每毫升发酵液酶活为为3.76单位(即16035μg丙烯酰胺/h).