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目的构建刺桐胰蛋白酶抑制剂突变体(rserETI)原核表达载体,制备表达产物,用于tPA的纯化。方法设计合成rserETI编码序列DNA片段,以PCR法扩增出全长编码区序列,经酶切后克隆至pET9a表达载体,转化大肠杆菌JM109DE3,以IPTG诱导表达。表达产物经变性、复性、QFF层析纯化后,测定其活性,并与溴化氰活化的Sepharose偶联合成亲和层析柱,纯化rtPA。结果rserETI的表达量约占大肠杆菌菌体总蛋白的30%,复性率为80%,经QFF层析纯化后,蛋白浓度为1.58mg/ml,SDS-PAGE检测显示无杂蛋白污染,纯度大于95%,对rtPA突变体的抑制比活性为4×104IU/mg。偶联合成的rserETI-Sepharose亲和层析柱能特异性地纯化rtPA,rtPA突变体纯度达96%,比活性为5.07×105IU/mg。结论已成功构建了rserETI原核表达载体,并在大肠杆菌中高效表达,制备的表达产物可用于rtPA的纯化。 相似文献
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通过楔形铜模铸造实验研究工业纯铝基体中TiB2颗粒的推移吞噬行为和颗粒或团聚体与液/固界面前沿之间的作用。实验结果表明:在整个楔形试样中,颗粒或团聚体的尺寸分别服从2个独立的分布,团簇被推移到楔形试样的中间区域,而单独的颗粒或小的团簇被楔形试样的边缘吞噬。在楔形试样的不同区域颗粒的团聚程度不同,在试样的边缘和中间区域,颗粒的团聚因子分别为0.2和0.6。颗粒的直径并不服从一般的正态分布,而是基本服从对数正态分布。更重要的是,在整个试样中,颗粒或团簇尺寸服从2个对数正态分布。 相似文献
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VxWorks嵌入式实时操作系统环境下,用原始套接字进行网络程序设计,成功解决了通过单网络节点实现多点向一点单向发送报文的网络通信问题,对网络程序设计具有重要的意义. 相似文献
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