[35S]-甲硫氨酸掺入法测定某些补益药活性成分对 Aβ分泌速率的影响

[35S]-甲硫氨酸掺入法测定细胞Aβ分泌速率,观察知母活性成分ZMS和黄芪活性成分AST和HT,及两药合用对Aβ生成速率的影响.用[35S]-甲硫氨酸标记转染APP695基因的细胞,所获细胞上清以Aβ22-35单克隆抗体进行免疫共沉淀,结合Western印迹法,以配对对照(加载体)的Aβ条带灰度值为l,计算各用药组灰度的相对强度.本方法能稳定地测到细胞在24-72 h内分泌的Aβ量,同一受试样品在不同批实验中的变异(CV)在17%-32%之间.在培养液中中药活性成分的浓度为1×l0-5mo1/L时,受试物质中AST及ZMs AST合用对Aβ的分泌速率有明显抑制作用(P＜0.01).另两种受试物则无作用.黄芪活性成分AsT有抑制Aβ分泌的作用,ZMs与AST两药合用作用更为显著.