X射线照射后EL-4细胞p16mRNA和P16蛋白表达的变化

采用RT?PCR(逆转录聚合酶链反应)半定量方法检测p16基因转录水平的变化,采用免疫细胞化学方法检测蛋白表达,观察X射线照射对离体培养的EL?4细胞p16基因转录及蛋白表达的影响,证实p16基因转录表达在辐射诱导EL?4细胞G1期阻滞中的重要作用。结果表明,2.0GyX射线照射后2—48h,EL?4细胞p16mRNA水平增高,照射后72h恢复正常水平。P16蛋白表达于照射后2h开始增高,照射后12hP16蛋白表达非常显著高于对照组(p<0.01)。剂量?效应实验表明,0.5—6.0GyX射线照射后12h,?4细胞p16mRNAEL水平明显提高。2.0、4.0、6.0Gy组P16蛋白表达均非常显著增加(分别p<0.01)。研究证实,电离辐射能够诱导EL?4细胞p16基因转录及蛋白表达增高,其增幅呈现明显的剂量依赖性。提示辐射诱导p16基因转录表达增加在辐射诱导EL?4细胞G1期阻滞中发挥重要作用。     

电离辐射对EL-4细胞的P53蛋白及其下游基因MDM2 mRNA和蛋白表达的影响

采用流式细胞术和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ杂交检测了Ｘ射线照射后ＥＬ－４细胞中ｐ５３蛋白及其下游基因ＭＤＭ２ｍＲＮＡ和蛋白表达的变化,以探讨Ｘ射线照射诱导ＥＬ－４细胞Ｇ１期阻滞的分子机制。结果表明：经４ＧｙＸ射线照射后的ＥＬ－４细胞,ｐ５３蛋白表达在照射后２ｈ增高,４ｈ达峰值,持续至照射后２４ｈ（ｐ〈０．０５～０．００１）;ＭＤＭ２蛋白的表达在照射后４～２４ｈ明显升高（ｐ〈０．０５～０．０１）。进     

电离辐射诱导在金属硫蛋白在小鼠免疫器官中的表达

观察了电离辐射对金属硫蛋白（ＭＴ）在免疫器官中表达的影响。采用放射性＾１０９Ｃｄ血红蛋白亲和分析法检测组织中ＭＴ含量。观察０．５、２、４、６ＧｙＸ射线全身照射后１６ｈ,及４Ｇｙ全身照射后０．５、２、４、８、１６、２４、４８、７２ｈ,昆明小鼠胸腺及脾脏中ＭＴ含量的变化。结果发现,在０．５～６Ｇｙ剂量范围内胸腺中ＭＴ含量剂量依赖性增高,其中４Ｇｙ和６Ｇｙ组有统计学意义（ｐ〈０．０５）。４ＧｙＸ射线照射后８～４８ｈ胸腺中ＭＴ含量显著增高（ｐ〈０．０５～ｐ〈０．００１）。然而,量效及时研究均未见脾脏中ＭＴ含量的变化。以上结果表明,Ｘ射线能诱导ＭＴ在免疫器官中表达,但表现出明显的组织特异性。     

低剂量X射线全身照射对小鼠脾细胞糖皮质激素受体表达的影响

采用放射性配体结合法,观察了不同低剂量X射线全身照射对小鼠脾细胞糖皮质激素受体(GCR)表达的影响及75mGy全身照射后GCR表达的时程变化.结果显示,25、50、75mGy X射线全身照射后8h小鼠脾细胞GCR表达明显下降;75mGy X射线全身照射后4h GCR表达开始下降,8hGCR表达显著低于对照组.低剂量X射线全身照射可降低小鼠脾细胞GCR的表达,提示GCR表达下调可能在低剂量辐射免疫增强效应中发挥作用.     

电离辐射诱导EL-4淋巴瘤细胞G1期阻党政军及相关蛋白的表达

探讨X射线诱导EL－4细胞G1期阻滞及相关蛋白的表达。采用PI荧光标记 ,流式细胞术检测细胞周期的变化。用单克隆抗体免疫荧光标记,流式细胞术检测蛋白表达的变化。结果表明,2．0Gy和4.0Gy照射后12-72h,G1期EL－4细胞百分数显著高于假照射组（P＜0．05－p＜0.001).4.0Gy照射后EL-4细胞p53蛋白表达从照射后2h开始明显增高,持续至照射后24h(p＜0．05－p＜0．001）;p21蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0.05-p＜0.001);GADD45蛋白表达在照射后2h开始明显增高,持续至照射后48h(p＜0．05－p＜－0．001）;MDM2蛋白表达在照射后4h开始明显增高,持续至照射后24h（p＜0.05-p＜0.01）。结果提示,中等剂量X射线照射可诱导EL－4细胞G1期阻滞。p53、p21和GADD45蛋白表达在电离辐射诱导EL－4细胞G1期阻滞中起重要作用。     

[Ca2+]i在低剂量辐射诱导脾细胞免疫适应性反应中的作用

为探讨胞浆内游离钙离子浓度 ( [Ca2 +]i)在低剂量辐射诱导脾细胞免疫适应性反应中的作用 ,本文采用 Fura- 2 /AM双波长荧光测定法观察了不同剂量 X射线全身照射后小鼠脾细胞内 [Ca2 +]i的变化及低剂量辐射诱导的适应性反应。结果表明 ,小鼠接受 1.0～ 6.0 Gy X射线全身照射后 2 4 h,脾细胞内[Ca2 +]i呈剂量依赖性下降 ( p <0 .0 5～ p <0 .0 1) ,而小鼠接受 0 .0 75～ 0 .2 Gy较低剂量 X射线全身照射后 2 4 h,脾细胞内 [Ca2 +]i却明显高于假照射组 ( p<0 .0 1)。同时证实 ,预先给予 0 .0 75Gy低剂量 X射线全身照射可减轻其后 2 .0 Gy X射线全身照射对脾细胞内 [Ca2 +]i的抑制作用。提示低剂量辐射诱导脾细胞内 [Ca2 +]i的升高可能在低剂量辐射诱导脾细胞免疫适应性反应中起重要作用。     

小剂量单次全射照射诱导小鼠免疫适应性反应的剂量与…

采用Ｘ射线单次全射照射，观察诱导小鼠免疫适应性反应的预照射剂量（Ｄ１剂量）范围，损伤性剂量（Ｄ２剂量）范围，及Ｄ１与Ｄ２最佳间隔时间。实验证实，当Ｄ２为１．５Ｇｙ时，０．０２５－０．１Ｇｙ（剂量率０．０９１２５Ｇｙ／ｍｉｎ）可诱导胸腺细胞自发增殖及脾细胞对ＬＰＳ的适应性反应。当Ｄ１为０．０７５Ｇｙ时，Ｄ２在１．０－１．５Ｇｙ（剂量率０．３３Ｇｙ／ｍｉｎ）范围内，胸腺细胞自发增殖及脾细胞对ＣｏｎＡ、     

Kras基因与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的相关性研究

为探讨kras基因与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤的关系,先采用X射线照射BALB/c小鼠建立胸腺淋巴瘤模型,取胸腺淋巴瘤和正常胸腺,分别提取总RNA、合成cDNA和提取总蛋白,采用实时定量PCR(Quantitative realtime PCR,QRT-PCR)和Western blot法对kras基因mRNA和蛋白表达分别进行检测。结果表明,胸腺淋巴瘤kras基因mRNA表达水平(2.66±1.51)比正常胸腺组织(0.93±0.30)明显增高,两组比较有统计学意义(p0.05),胸腺淋巴瘤kras基因蛋白表达水平也高于正常胸腺组织。结果提示,kras基因与辐射诱发小鼠胸腺淋巴瘤密切相关,可能是辐射致癌的一种易感基因。     

低剂量X射线全身照射对小鼠脾细胞转铁蛋白受体表达的影响

采用直接免疫荧光流式细胞术方法,检测了低剂量Ｘ射线全身照射对小鼠脾脏淋巴细胞转铁蛋白受体（ＴｆＲ）表达的影响。结果表明,低剂量Ｘ射线全身照射可增强脾脏淋巴细胞ＴｆＲ的表达,由于ＴｆＲ是Ｔ淋巴细胞激活与增殖过程中表达在细胞表面的重要受体之一,与Ｔ淋巴细胞激活与增殖有着密切关系。所以上述结果可能是低剂量电离辐射增强机体免疫功能的又一证据,同时也说明ＴｆＲ在低剂量电离辐射免疫增强效应中起着重要作用。研究     

Aspergillus oryzae SAICAR合成酶基因的克隆及反义表达载体的构建

目的 构建Aspergillus oryzae新的红色表现型菌株用于天然色素生产。方法 构建Aspergillus oryzaeRIB40 cDNA文库,应用BLAST网络服务对Aspergillus oryzae RIB40 cDNA文库的EST数据进行同源性比较,从EST克隆扩增Aspergillus oryzae类SAICAR合成酶基因(sh1919f片段),反向插入pUSA真核表达载体。结果 完成反义表达载体的构建。Aspergillus oryzae类SAICAR合成酶氨基酸序列与Pichia jadinii、Saccharomyces cerevisiae和Schizosac-charomyces pombe的SAICAR合成酶氨基酸序列具有高度同源性。结论 类SAICAR合成酶基因反义表达载体的构建为其转染入Aspergillus oryzae菌株筛选红色突变菌株奠定了实验基础。