流动注射-化学发光抑制法测定三叶青中痕量山奈酚

基于在碱性介质中,山奈酚对钴铁氧体催化鲁米诺产生化学发光有明显的抑制作用,建立一种测定痕量山奈酚的流动注射-化学发光分析方法。考察了鲁米诺浓度、钴铁氧体浓度、反应介质以及pH值对化学发光体系测定山奈酚的影响,同时做多种共存物质对测定的干扰试验。在优化的试验条件下,该分析方法的线性范围5×10-9~1×10-6g·mL-1,检出限2.8×10-9 g·mL-1,对浓度为5×10-8 g·mL-1山奈酚平行测定11次,其相对标准偏差为2.9%。该方法用于三叶青中痕量山奈酚含量的测定,回收率为91%~107%。     

富阳三叶青优良品种选育与栽培

从浙江省富阳山区野生三叶青中选育出了小叶、紫藤、结红果，块根白色有粘质、有涩味、葫芦形的民间应用药性较好的三叶青优良单株。该单株定名为“富阳三叶青”，多年生草质攀缘藤本，藤长1~3m，嫰藤圆绿色，老藤圆紫色。该单株经多年试种，藤蔓扦插易生根成活，生长良好，病虫少，易当年结块根，翌年能投产，三年生以上能亩产三叶青鲜块根150kg以上。     

三叶青茎部不同溶剂提取物的功能成分、抗氧化及酪氨酸酶抑制活性研究

目的 以三叶青茎部为原料,探究三叶青不同溶剂提取物的功能成分、抗氧化及酪氨酸酶抑制活性。方法 采用乙醇超声法提取三叶青,获得醇提液及残渣。醇提液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对其进行分步萃取,残渣则采用蒸馏水多次提取,最终得到4种提取物。分别测定4种提取物总酚、总黄酮、总皂苷、总多糖、抗氧化及酪氨酸酶抑制活性,并进行相关性分析。结果 4种提取物中乙酸乙酯萃取物总酚、总黄酮、总皂苷含量最高,分别为40.22%±1.01%、38.56%±0.64%、6.15%±0.21%,正丁醇萃取物总多糖含量最高,为9.29%±0.25%。各萃取物均具有抗氧化和酪氨酸酶抑制活性,其中乙酸乙酯萃取物清除1,1-二苯基-三硝基苯肼(1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)自由基、超氧阴离子、2-苯基-4,4,5,5-四甲基咪唑啉-3-氧代-1-氧(2-phenyl-4,4,5,5-tetramethylimidazoline-3-oxide-1-oxyl,PTIO)自由基、羟自由基能力和铁离子还原能力(ferric reducing antioxidant power, FRA...     

三叶青主要成分抗炎作用及其机制

基于与Keap1蛋白的分子对接结果初步筛选,进而在血管内皮细胞低水平炎症模型下试验,对比分析活性成分对各类炎症相关因子的基因及蛋白表达影响。结果表明,三叶青根部的山柰酚-3-O-芸香糖苷、异槲皮苷、芦丁以及叶片中的5-咖啡酰奎宁酸、牡荆苷、荭草苷均能与Keap1蛋白紧密结合在Keap1与Nrf2蛋白相互作用的活性空腔中,从而可能使Nrf2解离并活化。6种活性成分均可缓解血管内皮细胞低水平炎症,其中作用最强的是牡荆苷。进一步发现牡荆苷可显著上调细胞内Nrf2基因和蛋白表达,下调Keap1蛋白表达,说明Nrf2被活化。此外,牡荆苷在细胞培养基及缓冲盐溶液中稳定性强,能以原型形式被血管内皮细胞吸收,以剂量依赖的方式显著抑制IL-6、IL-1β和ICAM等炎症相关因子的基因和蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平。牡荆苷可能通过与Keap1蛋白结合活化Nrf2及影响NF-κB通路活性来发挥强效抗炎作用。     

珍稀药用植物三叶青的高效微繁体系研究

三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg)是我国南方民间常用药,具有清热解毒、消炎、抗肿瘤等功效。社会需求导致其野生资源匮乏,并且人工繁育的研究滞后,严重阻碍了三叶青的规模化种植,加重了供需矛盾,限制了产业链的发展。文章以三叶青带腋芽的茎段为外植体材料,诱导侧枝的发生,通过继代、生根、移栽等过程,建立了三叶青高效微繁体系。结果表明,带腋芽的半木质化茎段(3~8节)作为外植体好于带芽茎尖;最佳腋芽诱导培养基为MS+1.5mg/L 6BA+0.025 mg/L NAA;最佳侧枝增殖培养基为MS+1.0 mg/L 6BA+0.025mg/L NAA,生长势下降时加入0.025mg/L GA;最佳生根培养基为1/2 MS+1.5mg/L IBA;移栽成活率可达到90%以上。该体系激素浓度配比低,操作简便,繁殖效率高等特征适合三叶青种苗的规模化和规范化育苗。     

三叶青根多糖提取工艺优化、分离纯化及结构表征

采用水浴提取三叶青根多糖(Polysaccharides from roots of Radix Tetrastigma,RTP),以多糖提取得率为响应指标,在单因素试验的基础上,通过响应面分析方法确定三叶青根多糖提取的最佳工艺为:提取温度96℃、液料比34:1(mL/g)、提取时间2h,该条件下三叶青根多糖提取得率为(21.23±0.77)%。通过Sevage法除蛋白,并依次经DEAE-52离子交换柱、Sepharose CL-4B凝胶柱分级纯化,得到组分RTP-3-1。高效液相凝胶渗透色谱分析RTP-3-1为高纯度多糖,其分子量为1 244.2kDa,傅里叶红外光谱分析显示RTP-3-1是酸性多糖,核磁共振氢谱显示RTP-3-1为α型多糖。     

怀玉山三叶青的生药学研究

本文主要从植物形态鉴别、性状特征、显微特征及一般理化鉴别等几个方面对江西怀玉山产的三叶青药材进行了系统的生药学研究。该研究为三叶青品种的鉴别及进一步开发和利用提供了一定的科学依据。     

仿野生种植三叶青不同部位总黄酮分析及其抗炎、抗氧化能力比较

目的：比较仿野生种植三叶青不同部位中总黄酮含量、抗氧化活性以及抗炎能力差异。方法：采用醇提工艺对仿野生种植三叶青茎叶、块根、根须进行提取,比较不同部位间总黄酮含量差异;通过DPPH自由基、ABTS+自由基、羟自由基清除实验以及铁离子还原力测定,比较仿野生种植三叶青不同部位间抗氧化能力的强弱;采用脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞作为炎症模型,通过细胞NO的释放量比较仿野生种植三叶青不同部位间的抗炎能力差异。结果：在最佳提取工艺条件下,测得仿野生种植三叶青茎叶、块根、根须总黄酮含量分别为11.86±0.23、8.48±0.10、7.52±0.02 mg·g^-1;建立三叶青HPLC指纹图谱,共标定了10个共有峰,通过对照品指认出6号峰为芦丁、8号峰为槲皮素、9号峰为山奈酚,并对其含量进行检测,结果显示块根中三种指标成分含量均最高,其次根须,茎叶最低。检测仿野生种植三叶青不同部位对DPPH自由基、ABTS+自由基以及羟自由基的IC50值,茎叶分别为0.2107、0.2315、0.7625 mg/mL;块根分别为0.3134、0.3758、0.8967 mg/mL;...     

三叶青原花青素结构分析

利用核磁共振碳谱、反相高效液相色谱-电喷雾质谱联用技术联合基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）技术对三叶青根、茎及叶原花青素进行结构分析。结果表明,三叶青原花青素主要由原花青定和原翠雀定构成,末端单元以儿茶素为主,延伸单元以表儿茶素和表没食子儿茶素为主。三叶青根、茎及叶原花青素的平均聚合度分别为4.89±0.33、3.77±0.19及4.45±0.48。利用MALDI-TOF MS检测出三叶青根、茎原花青素的三聚体到十聚体,叶原花青素的三聚体到十一聚体。每个聚体内部普遍存在（表）儿茶素和（表）没食子儿茶素结构单元,没食子酰基化以及A型连接。三叶青根、茎及叶原花青素在结构上具有一定的相似性。本研究结果可为三叶青原花青素的基础研究和开发利用提供一定参考。