血清乳酸脱氢酶在急性溶血性贫血诊断及疗效评估中的应用

目的 :分析血清乳酸脱氢酶(Lactate dehydrogenase,LDH)在急性溶血性贫血(Acute hemolytic anemia,AHA)诊断及疗效评估中的应用。方法 :118例AHA患儿纳入AHA组,并选取同时期100名无溶血性贫血史的体检儿童,纳入对照组。检测两组受试儿童血清LDH水平,比较AHA组不同病情患儿血清LDH差异,并分析AHA患儿治疗前后血清LDH变化,分析LDH在AHA诊断及疗效评估中发挥的作用。结果 :AHA患儿血清LDH水平均高于对照组,其血清Hb水平低于后者,随着患儿病情的进展,其血清LDH水平逐渐升高、血清Hb水平逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。血清LDH与Hb水平呈负相关(r=-0.693,P<0.05)。118例AHA患儿临床总有效率为81.36%(96/118),随着患儿病情的加重,其有效率逐渐下降,差异有统计学意义(P<0.05)。AHA组患儿治疗后血清LDH水平均较治疗前下降,完全缓解者血清LDH水平下降最为明显,其次为部分缓解者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:检测血清AHA水平变化能够为AHA的早期筛查诊断、病情判断及疗效评估提供可靠参考。     

嗜水气单胞菌RecA和Gap-2作为内参蛋白的评价

为确定嗜水气单胞菌中可用于Western Blot的适宜内参蛋白,考察了重组酶RecA和3-磷酸甘油醛脱氢酶Gap-2在该菌不同培养阶段及培养条件下的表达稳定性.以嗜水气单胞菌基因组为模板扩增recA和gap-2基因,并对蛋白进行异源表达.利用亲和层析和凝胶过滤层析技术纯化蛋白,制备多克隆抗体.通过Western Blot技术研究了RecA和Gap-2蛋白在嗜水气单胞菌不同培养时间、不同培养温度和培养环境中铁离子浓度差异条件下的表达情况.结果显示,重组表达载体pET-28a-recA和pET-28a-gap-2构建成功,可与His标签融合表达.纯化后得到了纯度较高的RecA和Gap-2,以二者为抗原制备的多克隆抗体效价均达到1:512000.Western Blot结果表明,RecA在细菌生长稳定期表达情况与前期有所差异,而Gap-2蛋白在该菌不同培养时期、温度及铁离子浓度差异的环境中表达较为恒定.研究表明,Gap-2更适合作为嗜水气单胞菌Western Blot检测用内参蛋白.     

3-甾酮-△^-脱氢酶的融合表达及纯化

3-甾酮-△^1-脱氢酶是甾体母核降解的关键酶。能催化3-甾酮化合物在C1.2位处脱氢，提高原有底物的生物活性。利用表达载体pET-30a，实现了简单节杆菌3-甾酮-△^-脱氢酶在大肠杆菌BL21（DE3）中的高效表达。利用SDS-PAGE分别对超声破碎后的上清和沉淀进行分析．并用分光先度法检测酶的活力。结果表明，表达出的蛋白主要以无活性的包涵体形式存在。利用Ni离子螯合层析的方法纯化融合蛋白，复性后的酶活比简单节杆菌提高了近10倍。     

以分子动力学模拟探究苹果酸脱氢酶的嗜极机制

为了研究嗜热酶、嗜冷酶在极端温度下维持稳定性和活性的机制,本文通过分子动力学模拟的方法,从原子尺度上分析了嗜热苹果酸脱氢酶及其同源嗜冷酶的分子动力学特性。数据显示嗜热酶所形成的盐桥和氢键明显多于嗜冷酶。通过比较均方根偏差、回旋半径、氨基酸残基的柔性等值,发现嗜热酶的结构较非嗜热酶更具刚性。盐桥、氢键数目的不同和整体结构的刚柔性,很可能会是嗜热、嗜冷酶在极端温度下能维持结构稳定的主要原因。     

丙酮酸脱氢酶复合酶系研究进展

对丙酮酸脱氢酶复合酶系的组成、功能及特性进行了简要的综述.丙酸酸脱氢酶系是1个定位在线粒体中的多酶复合体.它是由3种酶:丙酮酸脱氢酶(E1)、二氢硫辛酸乙酰转移酶(E2)、二氢硫辛酸脱氢酶(E3)和调节它的活性的丙酮酸脱氢酶激酶、一种丙酮酸脱氢酶磷酸酶以及功能未知的蛋白X,还有一些辅助因子组成.在能量代谢调控过程中,丙酮酸脱氢酶系是1个主要的酶系.丙酸脱氢酶转化来自于碳水化合物和一些氨基酸的丙酮酸成为乙酰辅酶A.乙酰辅酶A是三羧酸循环的底物.丙酮酸脱氢酶系活性的调节可以通过PDH的磷酸化和脱磷酸化来调节平衡在许多组织中的源于碳水化合物和脂肪酸的乙酰辅酶A.丙酮酸脱氢酶发生突变后而不能行使正常功能,乳酸集结引起乳酸中毒.     

嗜热艾登短芽孢杆菌对聚乙烯醇的降解性能及机制

【目的】探究嗜热菌高效降解聚乙烯醇(PVA)的作用机制,为提升PVA污染治理效率提供理论基础。【方法】采用凝胶渗透色谱、UV光谱和红外光谱研究嗜热菌(Brevibacillus aydinogluensis FAFU 038)对PVA的降解性能,并对降解过程中PVA降解酶进行鉴定分析,建立酶反应动力学方程。【结果】在初始PVA浓度为1.00 g/L的体系中,48 h内嗜热菌FAFU 038对PVA的降解率可达到78%,120 h后稳定在80%,且对于低浓度和低聚合度的PVA降解效率更高。菌株FAFU 038可以降低PVA的分子质量,断裂分子链,可能产生酮类或醛类等小分子物质。降解的主要原因可能是由于嗜热菌胞内及胞外分泌的脱氢酶和氧化酶,其中胞外酶活占比45.02%。酶动力学方程表明：PVA浓度接近4.00 g/L时,该PVA降解酶可达到最大反应速率(V=7.18 U/min),米氏常数为3.47×10^-3 mol/L。【结论】嗜热艾登短芽孢杆菌FAFU 038能够高效降解PVA,脱氢酶和氧化酶是促进PVA降解的主要活性酶。     

基于葡萄糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶的NADPH高效再生

目的：构建辅酶NADPH高效再生的基因工程菌,获得辅酶NADPH高效再生的最佳工艺条件。方法：利用基因工程技术将辅酶NADPH再生关键酶的基因glk和zwf导入到大肠杆菌BL21中,实现辅酶NADPH循环高效再生,并优化辅酶NADPH再生的工艺条件。结果：成功构建了含有辅酶NADPH再生关键酶两个基因的重组大肠杆菌BL21/pETDuet-1-glkzwf;通过正交设计优化试验,获得重组工程菌株产辅酶NADPH的最佳工艺条件是：诱导温度20℃、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷浓度0.25 mmol/L、接种量1.5%、装液量100 mL/250 mL。在此条件下进行1 L发酵摇瓶诱导培养48 h,辅酶NADPH产量高达151.79μmol/L。结论：研究结果为辅酶NADPH循环再生提供了良好的理论基础。     

磁性颗粒对厌氧氨氧化启动过程的影响

为探究磁性颗粒对厌氧氨氧化启动过程的影响,采用2个ASBR反应器进行实验,其中一个反应器不添加磁性颗粒,另一个反应器添加磁性颗粒,初步探明了磁场对ASBR反应器内氮转移过程的影响机理。通过小试方式对比研究了不同磁性颗粒投加量对于反应周期内氨氮和亚硝态氮去除效能以及脱氢酶活性的影响。结果表明,磁场的存在能够促进厌氧氨氧化启动过程中的优势菌落演替以及厌氧氨氧化菌的富集,有效缩短厌氧氨氧化的启动周期;投加30 g/L磁性颗粒可以有效提升微生物的活性,提高反应速率。     

鳜养殖池塘底泥脱氢酶活性测定方法的研究

对鳜养殖池塘底泥脱氢酶活性的测定方法中的反应条件(反应温度、反应时间、萃取剂、萃取时间和缓冲液的pH等)进行了研究。结果表明:在反应时间为30 m in,缓冲液pH为8.4,反应温度为37℃,萃取剂为乙酸乙酯,样品萃取时间为1 h的条件下,对4个底泥样品中脱氢酶活性的重复测定结果显示,该方法有较高的精密度(变异系数≤5.89%)。