赤红球菌组氨酸激酶的融合表达和功能分析

对赤红球菌的组氨酸激酶基因进行密码子优化，将优化后的组氨酸激酶基因（rhks）构建重组表达质粒pGEX-4T-2-rhks。将此质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）中进行异源表达。在25 ℃和1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导条件下，组氨酸激酶融合蛋白（GST-RHK）获得成功表达，并具有催化活性。经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化，获得电泳纯的GST-RHK，其中纯化倍数为3.1，得率为19.5%。该蛋白大小约为72.75 kDa，Km、Vmax和Kcat值分别为20.92 μmol/L、0.17 μmol/（L·min）和1.4 min－1。野生型赤红球菌、组氨酸激酶基因增强株sdrhkE和组氨酸激酶基因敲减株sdrhkD在分别含有苯酚、甲苯、氯苯、异辛烷4 种有机溶剂的培养基中培养，菌株sdrhkD的生长情况都优于野生型赤红球菌，菌株sdrhkE的生长情况都低于野生型赤红球菌。本研究为进一步揭示赤红球菌SD3中组氨酸激酶涉及的信号转导途径与赤红球菌有机溶剂耐受性的关联机制提供一定参考依据。     

血清miR-141在糖尿病肾损伤患者中的表达及与远期预后的关系

目的:分析血清miR-141在糖尿病肾损伤患者中的表达及与远期预后的关系。方法:选取2017年1月-2019年6月于本院就诊的72例糖尿病肾损伤患者作为观察组,选取同期于本院进行健康体检的48例健康体检者作为对照组,比较两组血清miR-141表达水平在不同临床病理参数情况下的表达水平,并分析观察组不同肾脏损伤程度与血清miR-141表达水平的相关性,对观察组血清miR-141表达水平与远期预后情况进行评价。结果:观察组收缩压、舒张压、血肌酐表达水平以及血清miR-141表达水平均明显高于对照组,血红蛋白与白蛋白表达水平均明显低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。糖尿病病史≥10年、尿蛋白≥3.0 g/L、血肌酐表达水平≥150μmol/L以及血尿素氮表达水平≥7.5 mmol/L的患者血清miR-141表达水平均明显高于未超过其标准的患者,eGFR≥60 mL/(min·1.73 m~2)患者血清miR-141表达水平明显低于未超过其标准患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组不同肾小球分级、IFTA分数以及间质炎症分数血清miR-141表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。肾小球分级Ⅳ级、IFTA 3分以及间质炎症2分高表达占比均明显高于低表达,差异均有统计学意义(P<0.05)。观察组27例患者在随访期间出现终末期肾病,其中血清miR-141低表达水平中占6例,血清miR-141高表达水平中占21例,血清miR-141高表达水平随访期间出现终末期肾病的风险比低表达高3.5倍。结论:糖尿病肾损伤患者血清miR-141表达水平明显高于正常人,且其表达水平与糖尿病肾损伤患者的肾损伤水平以及预后具有相关性;血清miR-141表达水平越高,糖尿病肾损伤患者肾损伤程度越严重,其预后程度越差,在临床上具有一定预后价值。     

抗真菌蛋白Rs-AFP2基因定点突变及其对大肠杆菌中表达的影响

为了研究遗传密码子对表达调控的影响,利用PCR重叠延伸法,对萝卜抗真菌蛋白Rs-AFP2基因编码序列区的部分核苷酸进行沉默突变,构建突变体Rs-AFPm.序列分析表明,PCR产物全长240bp,有一个阅读框,编码的蛋白由29个氨基酸的信号肽和51个氨基酸的抗真菌蛋白组成.突变体与突变前的Rs-AFP2基因相比,在编码区第3号氨基酸Lys相差一个碱基(TTG→TTA),第5号氨基酸Gln相差一个碱基(CAG→CAA),第6号稀有密码子Arg相差两个碱基(CAG→CGA).重新合成引物,将切除信号肽的Rs-AFP2基因和Rs-AFPm基因与原核表达载体pET-21b(+)分别重组到大肠杆菌BL21菌株.IPTG诱导后,二者均得到了表达.软件分析显示,突变前pETAFPo表达产物占全菌蛋白的3%,突变后pETAFPm的表达产物占全菌蛋白含量的8%;表达蛋白主要以包涵体的形式存在,包涵体经超声波破碎后,蛋白质复性,抑菌结果表明,pETAFPm表达产物的抑菌半径大于pETAFP2表达产物的抑菌半径.这些都说明改造后的Rs-AFPm基因与Rs-AFP2基因相比,已有效地提高表达量.     

抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20-47)的单链抗体在转基因烟草根分泌物中的初步表达

为探索利用植物根分泌表达重组蛋白的可行性，构建了含有抗乙肝病毒表面抗原PreS1(20—47)单链抗体(ScFv)基因的表达载体。该ScFv基因转化烟草后在烟草根部细胞的细胞质和内质网中获得表达。实验结果表明，5’端融合ER导向信号肽的重组ScFv可通过根分泌表达。     

遗传算法在期货市场创新决策中的应用

研究了遗传算法在期货市场创新决策中的应用问题，在期货市场的保值者和投资者数目以及期货合约结构模型的基础上，设计了期货市场创新的染色体表达和遗传操作并进行了仿真研究。     

敏捷夹具构型设计系统的体系结构、知识表达与推理策略

介绍了敏捷夹具系统的基本特征，提出了敏捷夹具构型设计系统的体系结构，论述了敏捷夹具构型设计的知识表达、推理策略及其实现方法。