二氢叶酸还原酶抑制剂的量子化学研究——吡啶并嘧啶类衍生物的定量构效关系

利用量子化学方法,将二氢叶酸还原酶抑制剂--吡啶并嘧啶类衍生物的电子结构进行了计算分析和线性的拟合.结果表明化合物的5位取代基的体积,最低空轨道的能级,分子偶极矩,能级差有着显著的相关性.回归分析得到了相关性好的相关模型（R=0.93）.     

二氢叶酸还原酶在盐溶液中的分子动力学模拟

为了研究嗜盐酶如何在高盐环境下维持稳定性与活性,本文以沃尔卡尼极嗜盐菌及大肠杆菌的二氢叶酸还原酶(DHFR)为模型,将二者分别置于5种不同盐浓度的水溶液中进行分子动力学模拟。经9ns动力学模拟,得到了二者在不同浓度盐溶液中的运动轨迹,通过对运动轨迹的分析,获取了二者在不同盐浓度下的动力学特性。结果发现嗜盐古生菌的二氢叶酸还原酶自身所形成盐桥及与溶剂所形成的氢键均比大肠杆菌的二氢叶酸还原酶多,而溶剂可及性表面则要小,二者差异均达极显著水平。同时还分析了这两种分子及其氨基酸残基的柔性等。     

厄斯考维菌产羰基还原酶的发酵条件优化

从土壤中筛到一株产羰基还原酶的菌种骚动厄斯考维菌（Ｏｅｒｓｋｏｖｉａ　ｔｕｒｂａｔａ）ＺＪＰＨ１６０４,利 用该微生物细胞可不对称催化３－氯苯乙酮合成（Ｒ）－ １－（３－氯苯基）乙醇,对映体过量值＞９９．９％．通 过单因素试验发现：酵母提取物、（ＮＨ４）２ＳＯ４ 和ＫＨ２ＰＯ４ 为影响酶活的显著影响因子,继而采用 响应面法对产酶条件进行了优化．结果表明：最优发酵培养基组成为葡萄糖１５．０ｇ／Ｌ,酵母提取物 ３０．０ｇ／Ｌ,（ＮＨ４）２ＳＯ４２．６ｇ／Ｌ,ＫＨ２ＰＯ４２．８ｇ／Ｌ,ＮａＣｌ　０．６ｇ／Ｌ,ＭｇＳＯ４０．８ｇ／Ｌ．在最适培养条 件下,菌体羰基还原酶的酶活力达到３２．０Ｕ／ｇ,较优化前提高了１６６．７％．为高效合成（Ｒ）－ １－（３－氯 苯基）乙醇提供了新途径,丰富了生物不对称合成手性药物中间体的手段．     

亚硫酸盐还原酶的分离纯化和酶学性质的研究

采用硫酸铵盐析、Sephadex G-100凝胶过滤、DEAE-52纤维素柱层析一系列纯化步骤,得到电泳纯的亚硫酸盐还原酶,纯化倍数为115.30,酶回收率为18.36%.用SDS-PAGE测得亚基相对分子质量为66 kDa.酶反应的最适温度和pH分别为30℃和7.7.热稳定性较好,80℃时酶活仍能维持在55%左右.在pH 4～10之间均较稳定,残余酶活均在60%以上.Fe3＋,Zn2＋,Cu2＋,Mn2＋,Co2＋对亚硫酸盐还原酶有明显的抑制作用,Ca2＋,Zn2＋Ag＋,Fe2＋对亚硫酸盐还原酶有轻微的抑制作用,其他离子在实验浓度范围内对酶活无明显影响.以亚硫酸钠为底物,该酶的Km为1.23 mmol/L,Vmax为6.80 u/mL.     

通过核糖核苷酸还原酶M2逆转肝癌细胞对5-氟尿嘧啶耐药

目的：探讨核糖核苷酸还原酶M2（RRM2）在肝癌细胞对5-氟尿嘧啶（5-FU）耐药中的作用,并开发潜在的策略来提高肝癌细胞对5-FU的敏感性。方法：利用Western blot检测5-FU耐药肝癌细胞（BEL/5-FU）与非耐药肝癌细胞（BEL7402）中RRM2蛋白的表达差异;通过用RNA干扰技术下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达或RRM2抑制剂3-AP（Triapine）抑制RRM2活性;CCK-8和集落形成实验用于检测细胞的增殖能力;使用高内涵细胞成像系统仪检测与分析细胞凋亡。结果：BEL/5-FU细胞中RRM2的表达量是BEL7402细胞的2.5倍。RNA干扰技术能够下调BEL/5-FU细胞中RRM2的表达,并使5-FU对BEL/5-FU细胞的半数抑制浓度（IC50）下降约50%,同时细胞集落形成能力也显著减弱。3-AP与5-FU联合处理BEL/5-FU细胞,使5-FU对BEL/5-FU细胞的IC50下降约40%,细胞集落形成能力减弱,并促进5-FU导致的细胞凋亡。结论：RRM2与肝癌细胞对5-FU的耐药相关,本研究通过抑制RRM2的活性来逆转肝癌细胞对5-FU的耐药,为提高肝癌的5-FU化疗疗效提供新靶点和新思路。     

5-芳亚甲基-N-(4-羧基苯基)罗丹宁衍生物的微波辅助合成及分子模拟研究

以对氨基苯甲酸为原料,采用简易方法合成N-(4-羧基苯基)罗丹宁,并在醋酸和醋酸钠体系中与芳香醛化合物经回流反应或微波辐射合成(Knoevenagel缩合)得到系列标题化合物,并用Sybyl-X 2.0程序研究了标题化合物与烯酰基载体蛋白(ACP)还原酶的分子对接情况。     

牛背最长肌高铁肌红蛋白还原酶的分离及其酶学性质

以冷鲜牛背最长肌为原料,采用硫酸铵盐析、超滤法对原料肉中的高铁肌红蛋白还原酶进行粗分离,并研究温度、pH、金属离子对高铁肌红蛋白还原酶活性的影响.结果表明:在硫酸铵饱和度65％,超滤(＞50 kDa)条件下,牛背最长肌高铁肌红蛋白还原酶可得到分离与纯化.试验范围内,牛背最长肌高铁肌红蛋白还原酶的分子量为29.0～66....     

蜡样芽孢杆菌烯醇还原酶基因的克隆、表达和酶学性质研究

从蜡样芽孢杆菌WZY004基因组DNA中克隆获得了烯醇还原酶基因,并在大肠杆菌BL21(DE3)中以可溶形式过量表达。重组烯醇还原酶经Ni-NTA亲和层析分离纯化后,对其酶学性质进行了详细表征。该重组酶经SDS-PAGE检测为单一条带,其分子量为38.2 k D。该酶最适p H和温度分别为7.5与60°C。对氧代异佛尔酮的Km和Vmax值分别为1.83 mmol/L与1.13 U/mg。底物特异性分析表明该酶对柠檬醛、2-甲基-2-戊烯醛和反式-2-癸烯醛均有较高活力,其中对柠檬醛的比酶活高达1.33 U/mg。     

大蒜对莴笋乳酸发酵中亚硝酸盐形成的抑制作用

在盐水中添加蒜汁进行莴笋乳酸发酵,与不加蒜汁相比,大蒜可以极明显地抑制亚硝酸盐的形成,避免“亚硝峰”的出现,抑制率达98%以上。添加蒜汁还可以增进产品感官质量,促进发酵进程。发酵前,对原料进行80℃、3分钟热烫,可减少硝酸盐、亚硝酸盐的含量,使硝酸盐还原酶失活。产品贮藏后,硝酸盐、亚硝酸盐的含量减少。     

高铁肌红蛋白含量和高铁肌红蛋白还原酶活性与冷鲜肉肉色稳定性关系的研究

以皖白Ⅲ背最长肌和腰大肌为研究对象,研究了冷藏1～9d肉样肉色稳定性与高铁肌红蛋白含量和其还原酶活性的关系.结果表明,腰大肌亮度(L*值,P＜0.01)极显著低于背最长肌,而红度(a*值,P＜0.05)显著高于背最长肌;a*值随储藏期延长呈下降趋势,L*值和b*值呈整体上升趋势;三者表明储存期越长,肉色将越暗.a*值与高铁肌红蛋白含量呈弱负相关性;而与还原酶活性呈中等程度正相关,其中3、5、7d二者正相关达到显著性水甲(p＜0.05).根据研究结果建议冷鲜肉储藏期不宜超过5d.