密码子优化的牛精蛋白基因在大肠杆菌中的表达

以PCR的方法得到牛精蛋白基因的基因，去其内含子，得到牛精蛋白cDNA，克隆入原核表达载体pGEX-2T中，组装成表达载体pGEX-2T-PE，利用大肠杆菌偏好的编码精氨酸的密码子CGT将野生型牛精蛋白基因中编码精氨酸的稀有密码子（AGA或AGG）替换掉，通过基因合成得到密码子优化的牛精蛋白的基因，将其克隆入原核表达载体pGEX-2T中，组装成表达载体pGEX-2T-PS。将这两个表达载体分别转化入大肠杆菌表达菌株BL21中，经IPTG诱导，同样条件下，野生型牛精蛋白基因无法得到表达，密码子优化的牛精蛋白基因能够得到良好的表达，表达产物约占细菌总蛋白的18％，将表达蛋白纯化，进行DNA－蛋白结合实验，发现其能与DNA发生非特异性的结合。     

转基因羊乳抵御肠道有害细菌

美国科学家的一项新研究显示，一种成分与人类母乳相似的转基因羊乳能大幅减少幼猪大肠内有害细菌的数量。这种羊乳含有母乳中帮助婴儿抵御大肠杆菌的蛋白质，科学家希望它能够改善发展中国家庭儿童的健康水平。     

日采用生物精密陶瓷粘合剂

各种建筑材料和室内装修中的粘合剂是污染室内环境的重要因素。为了减少这方面的污染，日本已经开始采用生物精密陶瓷粘舍剂。这种生物精密陶瓷粘合剂具有消除和分解臭味、异味，抑制大肠杆菌、霉菌等的繁殖，改善室内空气的多重效果。如果厨房和卫生间里出现霉菌时，只要部分改用这种新型的粘合剂，霉菌在很短的时间内就会消失。据介绍，这种生物精密陶瓷粘舍剂还能产生远红外线效果，有利于人的睡眠。     

利用大肠杆菌DNA和DNA酶切小分子片段进行细胞核的体外装配

利用大肠杆菌ＤＮＡ和ＤＮＡ酶切小分子片段进行细胞核的体外装配蒋争凡赵国燕刘春香翟中和（北京大学生命科学学院，北京１００８７１）近年来我们实验室成功地将多种生物的ＤＮＡ在非洲爪蟾（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）卵提取物中实现了非细胞体系核装配［１，２］。...     

我国首个家用杀菌电冰箱标准发布

11月30日，中国标准化协会在京发布由新飞牵头制定的我国首个家用杀菌电冰箱标准。该标准以大肠杆菌杀灭率、金黄色葡萄球菌杀灭率、白色念珠菌杀灭率等指标为尺度，对杀菌冰箱在性能上进行了界定。     

人Leptin基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的克隆Leptin基因,构建其重组表达菌株,并对表达产物进行免疫学鉴定。方法利用RT-PCR方法从脂肪细胞RNA中扩增出人瘦素前体(pre-Leptin)的cDNA片段和去信号肽序列的Leptin成熟基因片段,并插入pET32a中,转化大肠杆菌BL21(DE3),获得表达重组人瘦素(rh-Leptin)的菌株。结果DNA序列分析显示获得的pre-Leptin和成熟基因片段的序列与预计序列一致,菌株诱导后经SDS-PAGE检测,rh-Leptin表达量达菌体总蛋白的40%以上。Western blot分析显示重组Lep-tin具有免疫学活性。结论已获得高效表达Leptin的重组菌株。     

大肠杆菌肉碱脱水酶基因的克隆、测序及高效表达

［摘 要］目的 克隆并表达大肠杆菌肉碱脱水酶基因。方法 用聚合酶链反应（PCR）从大肠杆菌K12s中扩增大肠杆菌肉碱脱水酶基因caiB，测定其DNA序列，将caiB基因重组到T7启动子控制下的表达载体pET－28a（＋）中，构建表达质粒pETCaiB，转化大肠杆菌BL21（DE3），用1mmol/L异两基硫代-β-D半乳糖苷（IPTG）诱导表达。结果 克隆得到的肉碱脱水酶编码基因 caiB长度为 1221bp，与文献报道值相比,DNA序列有26个不同，氨基酸序列只有一个不同，即302位的丙氨酸变为苏氨酸。重组菌经IPTG诱导，可高效表达，SDS－PAGE分析表达蛋白相对分子质量约43000，表达产物含量占菌体总蛋白45％以上。结论 得到了高效表达肉碱脱水酶的重组菌，为制备L-肉碱创造了条件。     

高效表达干扰素α1b(IFN-α1b)工程菌的高密度发酵及干扰素纯化

目的 在构建高效表达IFN-α1b重组大肠杆菌工程菌的基础上,建立适合该工程菌的发酵和纯化工艺。方法 采用高密度培养方法(HCDC)和柱层析纯化技术。结果 发酵密度A_(600)可达70,表达量为菌体总蛋白的30％左右。经破菌、离心、离子交换和分子筛凝胶过滤得到IFN-α1b纯品,FPLC测定纯度为100％,活性为4.99×10~7 U/ml,比活为2.5×10~7 U/mg,均符合2000版《中国生物制品规程》要求。结论 已建立了适用于规模化生产的发酵纯化工艺。     

耐药大肠杆菌的致病性与免疫原性

目的了解大肠杆菌耐药株的致病性与免疫原性。方法临床分离耐药大肠杆菌,经适宜条件培养后接种小鼠,观察耐药菌株对小鼠的致病性;并选择已知血清型的不同耐药谱和不同耐药水平的菌,分别培养至对数生长期,经甲醛灭活后免疫小鼠,2周后分别用致死剂量的原菌株和同期分离菌株进行攻毒,考察耐药菌株免疫原性。结果24株耐药菌普通肉汤培养物分别感染小鼠,在接种后18h,存活率仅为4%。只有2株菌在1周内仍不能将小鼠全部致死,经小鼠体内传3代后,可在18h内致死小鼠。耐药谱广的菌株感染的小鼠,心肌发生颗粒变性、局灶性出血、坏死;肝脏糖元溶解,脂肪变性;脾脏轻度淤血,淋巴细胞减少;肾脏出血,肾小球肾炎,上皮细胞颗粒变性,水泡变性。而耐药种类少的菌株与对照敏感菌株感染的小鼠主要特征为脾脏出血、淤血,坏死,脾小体消失;肠上皮细胞坏死、脱落、卡他性肠炎。免疫小鼠以免疫用菌株攻毒,均可得较高的保护率,最低为75%,最高为100%。免疫小鼠用非免疫菌株攻毒,小鼠感染后症状出现较缓慢,在18h后出现死亡高峰。耐药种类少的菌株免疫小鼠,对同期分离的非免疫用的致病性大肠杆菌攻击的保护率偏低,而对受试的11种抗生素耐受7种以上的菌株免疫小鼠后,对致病大肠杆菌攻击的保护率显著提高,多数达到75%以上,经统计学分析差异显著。结论耐药大肠杆菌具有较强致病性,且耐药特性与其免疫保护效果相关,多重耐药株对当前流行菌株具有更好的免疫保护作用。     

大肠杆菌启动子启动强度的预测

启动子是DNA序列中的关键元件,直接影响生物的转录与表达,启动子的研究对转录机制的阐明以及整个基因组功能的注释都具有重要作用。然而,用实验方法对启动子进行检测费时费力,发展启动子预测的方法具有十分重要的意义。本文基于离散小波变换建立伪三碱基组成表征DNA序列,支持向量机建模,预测大肠杆菌启动子的启动强度。首先采用二维映射法对DNA序列进行映射,得到二维离散的数字序列,并将之合并为一维数字序列;采用离散小波变换对数字映射序列进行转换,将得到的小波变换结果与三碱基组成结合构建伪三碱基组成,离散小波变换中小波函数与小波分解尺度的优化通过5-折交叉验证选取;构建得到的伪三碱基组成作为支持向量机的输入参数,建模进行预测。训练集得到的预测相关系数R为0.9830,RMSE为0.0907;测试集得到的预测相关系数R为0.8606,RMSE为0.1014。结果表明,模型的预测效果良好,说明基于离散小波变换的伪三碱基组成能够有效地反映DNA序列中碱基的顺序信息,本文方法不仅能够有效地实现大肠杆菌启动子启动强度的预测,也为DNA其他生物功能的预测提供了参考。