用部分氨基序列对家蚕丝胶的表征

从桑蚕鲜茧制取丝胶，采用凝胶电泳法分离出3种主要丝胶A、M和P，经赖氨酰内切酶、胰蛋酶降解、逆相色层分离出氨基酸碎片，再利用气相定序器确定了丝胶的氨基序列，并根据丝胶Ser1基因编码顺序表征了3种丝胶的基本结构，表明丝胶A有别于丝胶M和P，因其不含构成Ser1蛋白质主要部分的38-氨基酸重复。     

约氏疟原虫Pys25和Pys48抗原的表达与产物活性初步研究

通过家蚕杆状病毒表面展示技术获得约氏疟原虫有性阶段候选抗原Pys25(217AA)和Pys48(455AA),以期建立一种新的鼠疟模型。首先利用大肠杆菌原核表达系统表达这两种抗原,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,同时利用家蚕杆状病毒表面展示技术,并改造pFastBac Dual载体,在其Ph启动子前端加入哺乳动物启动子CMV,并将目的蛋白基因与杆状病毒囊膜蛋白gp64基因片段融合表达,融合蛋白展示在病毒粒子表面。用其免疫Balb/c小鼠,在小鼠体内,CMV启动子启动融合蛋白表达,共同刺激小鼠产生多克隆抗体。通过间接ELISA检测,两种抗原抗体效价均能达到1∶12 800。本实验为后期免疫阻断效应研究、多时期多价疫苗的构建及鼠疫模型的建立提供了实验基础。     

信号肽引导源基因在昆虫表达系统中的分泌表达

将杆状病来源的gp67信号肽引导的慈姑蛋白酶抑制剂(API)基因与植物来源的慈姑蛋白酶抑制剂信号肽引导的慈姑蛋白抑制剂(API)基因，分别克隆到昆虫杆状病毒转载体pBacPAK8中，通过共转染将它们分别整合到昆虫病毒表达载体Bm—BacPAK6中，将获得的重组病毒CrBK—API2和CrBK—bpAPI4分别接种家蚕(Bombyx mori)细胞、家蚕幼虫及蛹体中，慈姑蛋白酶抑制剂得到了高效表达。从家蚕细胞的表达来看，外源表达产物大多存在于细胞外的上清液中；从家蚕幼虫体内表达来看，信号肽能引导外源基因高效表达，且表达产物的90％以上能分泌到细胞外；蛹体中的表达情况与幼虫中的相似，但表达产物出了不均一的现象，从表达产物的分子量测定来看，这两种信号肽在表达过程中都没有被切除。     

重组家蚕抗菌肽CM4对癌细胞骨架及核骨架破坏作用的观察

报道了重组家蚕抗菌肽ＣＭ４对离体Ｕ９３７,Ｈｅｌａ癌细胞骨架及核骨架损伤作用的扫描电镜观察。随着时间的延长,经重组家蚕抗菌肽ＣＭ４作用后的癌细胞骨架散乱,断裂,萎缩成团状;癌细胞呆断裂,部分凝聚成团,结构不完整。重组家蚕抗菌肽ＣＭ４与正常人白细胞作用后细胞骨架及核骨架未见损伤现象。     

家蚕品种茧丝纤度差异及相关分析

调查了8个家蚕品种的茧丝纤度,最小值和最大值分别为2.16dtex和2．87dtex。计算各品种的纤度方差,最大值为0．2401,最小值为0．0809,纤度方差值与纤度无关。不同品种不同茧层部位的茧丝纤度存在一定差异,但同…品种不同个体之间茧丝纤度变化差异较小。对纤度和其他茧丝性状进行相关分析,纤度与茧丝长和茧丝量呈显著正相关。     

氟吗啉对家蚕的毒性和安全性评价

研究了氟吗啉对家蚕的胃毒、触杀、熏蒸毒性,并进行安全性评价。试验结果表明：氟吗啉对家蚕2龄起蚕胃毒毒性的LC50为10548．4mg／L;对家蚕触杀毒性的结果为10000．0mg/L浓度以下对2龄起蚕没有毒性作用;对家蚕熏蒸毒性的结果为10000．0mg／L浓度以下对2龄起蚕没有毒性作用。与氟吗啉的推荐使用剂量100-200mg/kg相比,氟吗啉对家蚕安全,对家蚕毒性为“低毒”。     

昆虫病原线虫(EPN)对家蚕的安全性评价

[目的]以家蚕为试虫,测定昆虫病原线虫(entomopathogenic nematode,EPN)对家蚕的安全性。[方法]EPN对家蚕的侵染试验参照《农药生物活性测试标准操作规范》(杀虫剂卷)所述鳞翅目幼虫喷雾法和浸叶饲喂法进行;EPN对家蚕安全性试验参照《化学农药环境安全评价试验准则》第11部分——家蚕急性毒性试验方法进行。[结果]当浓度为15亿线虫/hm~2时,结果显示存在一定的风险。病原线虫喷施后6 h内取桑叶喂食,可显著影响家蚕虫的结茧率和化蛹率,存在一定的风险,但6 h后的桑叶喂食则对其没有显著影响。[结论]严格控制施药后的间隔时间,EPN制剂可在蚕桑地区使用。     

荧光定量PCR检测家蚕核型多角体病毒的研究初探

本文选用家蚕核型多角体病毒的单拷贝基因DNA聚合酶作为检测靶标,构建含有DNA聚合酶基因片段的质粒载体,作为标准品,试图运用荧光定量PCR技术对该病毒进行定量检测,以便于以后深入对病毒感染机制进行研究。试验结果初步证实,所构建的重组质粒可作为标准品用于荧光定量PCR试验,实时检测病毒在宿主中的数量。     

几种杀虫剂对家蚕的毒性评价研究

采用食下毒叶法测定25％吡虫啉WP、4．5％高效氯氰菊酯SC、40％丙·辛EC、40％敌百·氧乐果EC、20％氯氟氰·氯胺磷EC以及45％松脂酸钠SP农药对家蚕的急性毒性,并根据其毒性范围进行分级,评价其对环境的安全性。试验结果表明：4．5％高效氯氰菊酯SC对家蚕LC50〈0．5mg／kg,属于剧毒级;25％吡虫啉WP、40％丙·辛EC和20％氯氟氰·氯胺磷EC对家蚕LC50在0．5～20mg／ks之间,属于高毒级农药;40％敌百·氧乐果EC对家蚕200mg／kg〉LCso〉20mg／kg,属于中毒农药。5种化学杀虫剂的田间施药浓度／LC∞比值都远大于10,对家蚕具有极高的风险性。而生物农药45％松脂酸钠SP对家蚕毒性较低（LC50〉1000mg／kg）,属于低毒农药。