重组铜绿假单胞菌外毒素A工程菌发酵及表达产物的纯化

目的建立稳定、高效表达重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA)的工程菌发酵及表达产物纯化工艺。方法规模化发酵表达rEPA的重组大肠杆菌rPE553D,离心收集菌体,渗透压调解使菌体周质间隙蛋白释放后,高速离心收集蛋白溶液。经DEAESepharoseFF、PhenylSepharose6FF疏水层析和SOURCE30Q强离子交换层析,超滤浓缩纯化rEPA。用HPLC、SDS-PAGE和Westernblot等方法检定生化和免疫学特性,并用小鼠和Vero细胞检定毒性。结果每55L培养基中rEPA产量超过4g,纯度在95%以上,细胞毒性降低了至少32000倍。其余各项指标均符合《中国生物制品规程》要求。结论已建立了收率高、纯度好、稳定、适合规模化生产rEPA的工艺。     

生物制药废水微生物强化实验研究

微生物强化是指向生化处理系统接种生长繁殖快、生物活性强的工程菌,以改善活性污泥的性能来提高废水处理效果.     

低温工程菌在污水处理厂A/O池中的应用

为了探讨生物强化技术在污水厂低温启动中的应用效果,在哈尔滨太平污水厂A/O池中投入构建的生物强化菌剂,对污水厂进行低温快速启动。结果表明:采取活化菌液、生物菌剂与生物污泥共同投加的方式,在气温低于10℃、水温低于14℃的条件下,采用先异步后同步的复合培菌方法,有效克服了不利因素的影响,在COD、NH4+-N和SS的进水平均浓度分别为210 mg/L、37.4 mg/L和218 mg/L时,出水水质分别达到44 mg/L、2.3 mg/L和16.6 mg/L,在低温条件下成功启动污水处理厂。结果表明,生物强化技术在寒冷地区低温期的应用能加快系统启动、有效提高污染物净化效能,系统稳定性和耐负荷冲击能力得以强化。     

利用基因工程菌修复富营养化水体

以徐州市黄河故道应用基因工程菌修复富营养化水体为研究对象，对水体中富营养化指标进行了测定，并对水体中生物生长变化情况进行了观察，试验和分析了基因工程菌中的消氮细菌及沉淀细菌对水体进行生物修复的作用及其效果，指出了存在的问题，为利用生物修复技术处理天然湖泊的富营养化提供了参考数据．     

利用CRISPRi技术构建乙醛酸生物合成Corynebacterium glutamicum工程菌

以谷氨酸棒状杆菌(Corynebacterium glutamicumATCC 13032)为出发菌株,敲除其支流代谢关键酶乳酸脱氢酶合成基因lldh,建立规律间隔成簇短回文重复序列干扰(clustered regularly interspaced short palindromic repeats interfer...     

重组E.coli工程菌高密度培养生产人源型胶原蛋白

引　言胶原蛋白是人体固有蛋白质之一 ,在皮肤里的含量最多 .胶原蛋白由于固有的生物兼容性、生物降解性和吸收性、促新细胞形成及促上皮细胞形成功能 ,在医学领域、美容、化妆品、保健品行业的潜在用途不断拓宽 .但是 ,动物体胶原蛋白是一种硬蛋白 (水不溶 ) [1] ,并且随着年龄的增长内部双键越来越多 ,同时也越来越硬 .一般经酶解获得的胶原蛋白为水不溶性蛋白 ,也不可能在不改变分子量的情况下重溶解 ,因此可加工性很弱 ,直接限制了许多潜在用途的开发 .另外 ,来自动物体的胶原蛋白不可能排除病毒隐患 ,同时始终带有牛胶原的特性[2 ,3] ,…     

治疗性双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺研究

目的研究双质粒HBV DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法首先通过计算质粒拷贝数,检测工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在传代过程中的遗传稳定性,通过摇瓶培养确定培养基组成,再在30L发酵罐内,通过改变培养基成分、培养时间、补料方式,确定最佳发酵参数。并将确定的最佳发酵参数应用于50L发酵罐连续3批中试规模的发酵,同时考察在发酵培养过程中质粒稳定性和超螺旋质粒DNA的比例。结果工程菌DH5α/pS2.S和DH5α/pFP在连续传代30次后,质粒拷贝数保持稳定。确定最佳发酵参数为以甘油为碳源的培养基培养,梯度恒速流加方式补料,培养时间为10h。通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌58.0~71.8g/L,质粒含量可达到1.11~1.58mg/g菌,超螺旋质粒DNA的比例达93%以上。结论已建立了稳定的双质粒HBV DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。     

酶切方式对工程菌植酸酶性质的影响

将无花果曲霉（A.ficuum)AS3.324的植酸酶基因（phyA)，克隆到pPIC9K中，得到重组载体pPIC9K/phyA Ⅱ，分别用限制性内切酶Dra I和Bpul 102 I线性化，用电穿孔转化方法导入宿主巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris)GS115中，构建了两种植酸酶工程酵母。本文比较了这两种工程菌表达的植酸酶的酶学性质。研究结果表明，两者的酶学性质无显著差异。     

重组HIV-1 DNA疫苗工程菌中试发酵工艺的优化

目的优化重组HIV-1DNA疫苗工程菌的中试发酵工艺。方法优化质粒转化条件,制备工程菌Jm109/pVAX1-MEGp24种子液,连续传30代,检测其遗传稳定性;优化培养基成分、补料基质、补料方式和培养时间,确定最佳发酵参数;并应用最佳发酵参数,于50L发酵罐进行3批中试规模的发酵,考察在发酵培养过程中质粒的稳定性和超螺旋质粒的比例。结果工程菌在连续传代30次后,质粒拷贝数基本保持稳定;最佳发酵参数为:采用以甘油为碳源的培养基,以梯度恒速流加方式补料,培养时间13h;通过3批稳定发酵,最终可获得湿菌67.0～68.6g/L,质粒含量可达1.62～1.73mg/g菌,超螺旋质粒的比例达93%以上。结论已建立了稳定的重组HIV-1DNA疫苗工程菌中试发酵工艺,为进一步规模化生产奠定了基础。     

含α-乙酰乳酸脱羧酶基因的啤酒酵母工程菌的构建

摘要：利用基因工程手段将食品级醋化醋杆菌的α-乙酰乳酸脱羧酶基因引入啤酒酵母中，使啤酒酵母获得编码此酶的基因并表达，检测到α-乙酰乳酸脱羧酶的活性，获得一株性能优良的啤酒酵母工程菌。经测试，构建的工程菌与出发菌在生理、生化、发酵特性等方面无差异，但发酵液中双乙酰的峰值及还原时间较出发菌降低1／3左右。