粗根荨麻不同部位多糖的提取及其对巨噬细胞的调节作用

目的：研究粗根荨麻（Urtica macrorrhiza Hand.-Mazz.）不同部位粗多糖的含量及化学组成，初步评价其对巨噬细胞的调节作用。方法：利用热水提取、乙醇分级沉淀的方法分别制备粗根荨麻根、茎、叶粗多糖；通过高效液相色谱法分析其分子量及单糖组成；全波长扫描及红外光谱分析其结构特征；MTT法研究其细胞毒性；中性红染色法考察其对巨噬细胞吞噬活性的影响；Griess法和ELISA法分别检测其对巨噬细胞NO、TNF-α分泌的影响。结果：提取得到粗根荨麻叶（UML40、UML60），茎（UMS40、UMS60），根（UMR40、UMR60）共6种粗多糖，其中叶粗多糖得率最高为4.62%,UML40为占77.92%，茎粗多糖和根粗多糖得率分别为0.69%和1.13%；各粗多糖平均重均分子量从2.11 kDa到802.21 kDa不等，主要由D-Glc、D-Gal、D-Ara和D-GalA组成，但不同部位粗多糖的单糖组成摩尔比不同。此外，不同部位、不同分子量的粗根荨麻多糖免疫活性存在较大差异，其中UML40、UMS40、UMR40均能够显著活化巨噬细胞，促进其吞噬活性及NO、TNF-α...     

LPS与巨噬细胞中htrα2的表达及相关性研究

通过LPS(lipopolysaccharide)分别刺激树突状细胞和巨噬细胞,发现巨噬细胞中HtrA丝氨酸蛋白酶2(HtrA serine peptidase 2,htra2)基因的表达随着刺激时间的延长呈现下调的变化趋势,提示巨噬细胞中的htra2受到LPS的调控.为了进一步证实LPS刺激的特异性,实验建立VSV(vesicular stomatitis virus)病毒感染巨噬细胞模型,采用荧光定量PCR,免疫荧光方法分别从htra2的蛋白水平和定位上研究htra2的变化与LPS刺激巨噬细胞产生效应的相关性;构建了htra2基因过表达的质粒pKH3-htra2-HA,采用ELISA,Western Blot及荧光定量PCR等方法,检测过表达htra2对巨噬细胞产生和分泌炎症因子IL-6(Interleukin-6)及IL-1b(Interleukin-1b)的影响.实验结果表明:htra2仅在LPS刺激巨噬细胞的体系中受到调控,且过表达的htra2会上调巨噬细胞IL-1b和IL-6的表达水平.     

酶转化制备人参皂苷Rg2及其对巨噬细胞增殖分化的影响

利用Absidia sp.G8r菌产酶液,以人参皂苷Re为底物进行酶转化制备人参皂苷Rg2。采用硅胶柱层析法分离纯化人参皂苷Rg2,探讨了人参皂苷Rg2对巨噬细胞增殖及单核-巨噬细胞分化的影响。结果表明,人参皂苷Re转化为Rg2,酶转化率为66.3%。硅胶柱层析法对产物分离纯化,得到高纯度Rg2,HPLC检测纯度达95%,得率为13.1%。人参皂苷Rg2对巨噬细胞增殖分化的研究表明,低质量浓度(25～100μg/mL)对巨噬细胞的增殖抑制作用不明显,高质量浓度(大于100μg/mL)时对巨噬细胞的增殖抑制作用明显;当Rg2质量浓度为100μg/mL时,能促进单核-巨噬细胞的分化。     

PF4通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9表达

目的观察血小板因子4(PF4)是否通过核因子κB(NF-κB)上调THP-1单核源性巨噬细胞基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达。方法佛玻酯诱导THP-1细胞分化成巨噬细胞。巨噬细胞分别在NF-κB抑制剂(PDTC)缺乏或存在情况下与溶媒或PF4(100μg/L)孵育一定时间,RT-PCR检测MMP-9 mRNA水平;同时,巨噬细胞与PF4(25~200μg/L)单独或结合Toll样受体4(TLR4)阻断剂(抗体HTA125,anti-TLR4)孵育,ELISA法检测NF-κB含量。结果 PF4较对照组上调巨噬细胞MMP-9 mRNA水平。而NF-κB抑制剂抑制PF4诱导的巨噬细胞MMP-9表达上调。PF4呈浓度依赖性增加巨噬细胞的NF-κB含量,最大效应浓度为100μg/L。TLR4阻断剂逆转PF4诱导的巨噬细胞NF-κB含量增加。结论 PF4可能通过NF-κB上调巨噬细胞MMP-9的表达。TLR4可能是PF4-NF-κB通路中NF-κB的上游信号分子。     

X射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞的肿瘤坏死因子α(TNFα)表达量的变化

用L929细胞染料摄入法检测了小鼠受不同剂量(75mGy,2.0Gy)X射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞肿瘤坏死因子α(TNFα)表达量的时程变化及全身照射后24h的剂量-效应关系.结果可见,75mGy照射后3h,TNFα表达量有所增加,从6～120h,均显著高于对照组,12h表达量最高;2.0Gy照射后3～120h,不同时间点均显著高于对照,表达量最高点为12h.从剂量-效应关系中可见,经50mGy～2.0Gy不同剂量照射后,TNFα表达量均显著高于对照组,0.5Gy照射组其表达量最高,而经4.0Gy和6.0Gy照射后,TNFα的表达量显著低于对照组.提示一定剂量电离辐射可诱导巨噬细胞产生TNFα.     

小鼠受X射线全身照射后腹腔巨噬细胞IL-1 β蛋白表达的变化

采用胸腺细胞联合增殖反应法,观察了不同剂量Ｘ射线全身照射后小鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ－１β蛋白生物活性的时程（７５ｍＧｙ和２．０Ｇｙ照射后６、１２、２４、４８、７２、１２０和１６８ｈ）变化和剂量效应关系（０．０７５、０．２、０．５、１．０、２．０４．０、６．０Ｇｙ照射后２４ｈ）。时程变化结果表明,７５ｍＧｙ照射后,小鼠腹腔巨噬细胞ＩＬ－１β蛋白生物活性逐渐增高,照后６、１２、２４ｈ明显高于对照组,且以照     

激活素A对巨噬细胞系RAW264.7细胞吞饮活性及TLR4表达的双向调节作用

目的探讨激活素A(ActivinA)对巨噬细胞系RAW264.7细胞活性的调节作用及其可能的机制。方法取对数生长期的小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞,加入1μg/ml脂多糖(LPS),继续培养8h,采用ELISA法检测细胞分泌ActivinA水平;分别加入ActivinA、LPS和ActivinA+LPS,中性红染料法检测细胞吞饮活性;流式细胞术分析细胞表面分子MHCⅠ、MHCⅡ及Toll样受体4(TLR4)的表达水平。结果LPS呈时间依赖性刺激RAW264.7细胞分泌ActivinA;ActivinA可明显促进静息RAW264.7细胞的吞饮活性,而对MHCⅠ、MHCⅡ及TLR4的表达水平无明显影响;ActivinA和LPS共同作用,ActivinA明显抑制了LPS活化的RAW264.7细胞的吞饮活性,并下调TLR4的表达。结论ActivinA可能以自分泌/旁分泌形式参与巨噬细胞活性调节,其抑制LPS作用与TLR4表达有关。     

外用重组人粒细胞-巨噬细胞刺激因子凝胶与注射用重组人生长激素联合应用对实验性烫伤动物的疗效

目的观察外用重组人粒细胞-巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶与注射用重组人生长激素(rhGH)联合应用对实验性烫伤动物的疗效。方法将脱毛的Wistar大鼠背部皮肤浸入(85±1)℃恒温水浴中持续15s,造成深Ⅱ度烫伤。大鼠烫伤部位分别涂抹外用rhGM-CSF凝胶、易孚凝胶、美宝湿润烧伤膏、磺胺嘧啶银、医用凡士林膏,金因肽组用金因肽喷湿创面,rhGH组和GM+GH组在烫伤后24h开始皮下注射rhGH。各组每天给药1次,连续用药25d。每5d用透明硫酸纸描绘烫伤皮肤面积,并称重,计算烫伤皮肤愈合率;烫伤后6h、9d和25d,各组随机选取3只大鼠,对其烫伤创面进行病理学检查。结果从给药第10天开始,各给药组大鼠烫伤皮肤愈合率均比模型组明显提高;以GM+GH组最高。病理学观察显示,烫伤后25d,各给药组大鼠绝大多数创面表皮细胞增生明显,真皮层可见毛囊、皮脂腺腺体修复,GM+GH组炎细胞浸润不明显,模型组多见化脓性炎症改变,并见脓肿灶形成。结论各给药组均可减轻烫伤后炎症反应,促进烫伤皮肤愈合,对深Ⅱ度烫伤大鼠皮肤有明显治疗作用,其中以外用rhGM-CSF凝胶联合应用rhGH的治疗效果最好。     

外用重组人粒细胞-巨噬细胞刺激因子凝胶对烧烫伤动物的疗效

目的观察外用重组人粒细胞-巨噬细胞刺激因子(rhGM-CSF)凝胶对实验性动物烧烫伤的治疗作用。方法采用电烙铁方法建立实验性大鼠烫伤创面,烫伤部位分别采用外用rhGM-CSF凝胶基质、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)喷雾剂、外用rhGM-CSF凝胶高(20μg/cm2)、低(5μg/cm2)剂量进行治疗,观察外用rhGM-CSF凝胶对烫伤创面的治疗作用,包括烫伤皮肤的病理学检查、烫伤创面的愈合情况、烫伤创面的感染情况及烫伤动物的死亡情况。采用凝固气油烧灼建立实验性小鼠Ⅲ°烧伤模型,烧伤部位分别采用rhGM-CSF凝胶基质、bFGF喷雾剂和外用rhGM-CSF凝胶进行治疗,观察小鼠死亡数量、感染情况及创面愈合后生毛时间。结果与凝胶基质对照组比较,外用rhGM-CSF凝胶高、低剂量治疗大鼠烫伤后的皮肤愈合时间明显缩短。病理检查结果显示,外用rhGM-CSF凝胶高、低剂量治疗大鼠烫伤创面的愈合程度明显优于凝胶基质对照组。外用rhGM-CSF凝胶对小鼠Ⅲ°烧伤具有保护和抗感染作用。烫伤创面愈合后生毛时间明显短于凝胶基质对照组。结论外用rhGM-CSF凝胶对实验性动物烧烫伤具有较好的治疗效果。     

肿瘤相关巨噬细胞（TAM）对肿瘤发生发展的影响

实体肿瘤微环境一直处于复杂的慢性炎性状态中,其周围充满丰富的炎性介质、炎性细胞,以及调控紊乱的血管系统和蛋白水解酶类。肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage,TAM）作为肿瘤相关炎症的主要参与者,它在促进肿瘤细胞增殖侵袭和迁移、新生血管形成以及产生免疫抑制等方面的功能对癌症的发生发展产生重要影响。因此针对TAM的深入研究具有重要的科学意义和临床价值,为肿瘤的治疗开辟新的思路和途径。