卵黄高磷蛋白及其磷酸肽稳定性和抗氧化性

对卵黄高磷蛋白(PV)及其磷酸肽(PPPs)的热稳定性、乳化活性和乳化稳定性以及高压脉冲电场对卵黄高磷蛋白二级结构的影响进行了实验考察,并研究了PV和PPPs的抗氧化活性,分别测定了PV和PPPs清除DPPH自由基的能力、还原力及与金属铁离子的螯合能力。结果表明,PV和PPPs具有较好的热稳定性、乳化性及稳定性,且PV要优于PPPs;经高压脉冲电场处理后的PV样品,其二级结构变化不大,说明高压脉冲电场不会改变PV的二级结构;此外,PV和PPPs具有较好的清除DPPH自由基、还原能力以及金属离子螯合的能力,说明PV和PPPs具有抗氧化能力,且PPPs要优于PV。     

副流感病毒5型CC-14株辅助质粒的构建及鉴定

目的构建副流感病毒5型(parainfluenza virus 5,PIV5)CC-14株核衣壳蛋白(nucleoprotein,NP)、磷蛋白(phosphoprotein,P)和聚合酶蛋白(large protein,L)基因真核表达质粒,并在MDCK细胞中表达,为该病毒反向遗传系统的建立奠定基础。方法根据PIV5 CC-14株全基因组中的NP、P和L基因分别设计特异性引物,经RT-PCR扩增得到NP、P和L基因,酶切后分别连接至pc DNA3.1+真核表达载体(或p MD18-T)上,构建辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L,转染MDCK细胞,RT-PCR检测NP、P和DL基因的转录情况。结果经双酶切及测序鉴定证明辅助质粒pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L构建正确,3个质粒转染MDCK细胞后,经RT-PCR分别可扩增得到NP、P和DL基因片段。结论成功构建了PIV5 CC-14株pc DNA3.1-NP、pc DNA3.1-P和pc DNA3.1-L辅助质粒,且均可在MDCK细胞中有效转录,为该病毒反向遗传系统的建立奠定了基础。     

卵黄高磷蛋白调控生物矿化的研究进展

近年来研究发现磷酸化蛋白质在生物矿化过程中起着重要的作用,而卵黄高磷蛋白是目前自然界中磷酸化程度最高的蛋白质之一,已有部分研究证明了卵黄高磷蛋白具有矿化调节作用,但关于它调控矿化的活性位点及具体机制还不明确。本文概述了生物矿化发生的环境、矿化原理、矿化过程及矿化调控等内容,对卵黄高磷蛋白调控生物矿化的相关假说及研究进展进行了探讨。     

卵黄高磷蛋白磷酸肽制备工艺的研究

以卵黄高磷蛋白为原料,经碱法脱磷,胰蛋白酶水解后制备成卵黄高磷蛋白磷酸肽(PPP)。研究表明,脱磷率为42.43%的PPP其钙结合能力最强,同时确定了PPP制备过程中的最佳酶解条件为:底物浓度为1%,温度为50℃,酶浓度6%,pH为10,此时卵黄高磷蛋白的水解度为21.8%。     

卵黄高磷蛋白磷酸肽及其钙螯合物在双细胞共培养体系中对成骨细胞分化的促进作用

研究了卵黄高磷蛋白磷酸肽（Phosvitin Phosphopeptide,PPP）及其钙螯合物（PPP-Ca）在成骨细胞（MC3T3-E1）和破骨前体细胞（RAW264.7）共培养体系中对成骨细胞分化的调节作用。对细胞毒性、碱性磷酸酶（AKP）、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）的活性和TRAP染色进行分析;用RT-PCR技术进一步探究成骨细胞RANKL/OPG通路相关蛋白的mRNA表达情况。结果发现,PPP和PPP-Ca可以使MC3T3-E1体系中的AKP活性分别增加9.5%和12.7%;PPP和PPP-Ca的加入可以使MC3T3-E1体系中OPG基因mRNA的表达量从0.92分别提升至1.25和1.39、使RANKL基因mRNA的表达量从1.00分别提升至1.23和1.45。该研究结果表明,PPP和PPP-Ca可有效促进成骨细胞的分化。实验结果为进一步探索磷酸肽在多细胞模型体系中的作用提供了研究基础,同时为磷酸肽的功能活性开发提供理论依据。     

鸡蛋中卵黄高磷蛋白的研究

本文介绍了鸡蛋中卵黄高磷蛋白的制备、功能性质及其开发应用的前景。     

静电纺丝技术在禽蛋蛋白质中的应用研究进展

禽蛋是蛋白质的天然宝库,其中多种蛋白质具有抑菌、免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等生物活性。蛋白质具有良好的生物相容性和可降解性,当其尺度到纳米级后,会导致其纳米材料具有许多理想的性能。静电纺丝是一种简单有效的制备纳米纤维的方法,因此经过静电纺丝将其制成纳米纤维,不但能提高比表面积和多孔率,更能发挥其重要的功能性质。本文对禽蛋中主要蛋白质如卵白蛋白、溶菌酶、卵黄高磷蛋白、可溶性蛋壳膜蛋白等的静电纺丝技术应用做一综述,为活性蛋白质电纺技术的后续研究提供参考。     

卵黄高磷蛋白的纯化及其对RAW264.7生长形态的影响

阴离子交换层析纯化卵黄高磷蛋白,最佳条件为以NaAc/HAc缓冲液(20 mmol/L、pH 5.0并含0.3 mol/L NaCl)平衡,0.3 mol/L～0.6 mol/L NaCl缓冲液分步洗脱;产品纯度(以N/P比计)为2.78,回收率57.6％,蛋白质含量85.66％.经PVS刺激的RAW264.7细胞在考察剂量范围内不会向炎症巨噬细胞的形态转变.     

人组织型纤溶酶原激活剂转基因功能鸡蛋的研究及其活性分析

为探索人组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)在鸡卵黄中积淀的可行性,开发具有抗心血管疾病的功能性鸡蛋,应用分子生物学技术分别构建含有人t-PA 基因和t-PA 与鸡卵黄高磷蛋白融合基因的真核表达质粒pcDNA3-tPA 和pPhosvitin-tPA,脂质体包裹后分别注射于初产蛋鸡的肝脏,Western blotting 和ELISA 检测t-PA 基因在鸡肝脏中的表达和在卵黄中的积淀情况,琼脂糖平板溶圈法检测期其活性。结果显示,注射重组质粒后7d,卵黄中有分子质量为63kD 的t-PA 积淀,表达可持续5 周,高峰表达量分别为39.16mg/L 和53.92mg/L;琼脂糖平板溶圈法检测其活性表明,卵黄中的t-PA 具有激活组织纤溶酶的活性。实验证明了外源基因表达产物在卵黄中积淀这一途径的可行性。