转基因油菜Ms8质粒分子外/内源基因比值的不确定度评定

数字PCR是一项不依赖校准物的DNA绝对定量技术,通过统计(泊松分布)反应室中的阳性信号来定量DNA的拷贝数。该文对转基因油菜Ms8质粒分子进行构建和纯度分析后,采用荧光定量PCR对质粒分子的可替代性、均匀性和稳定性进行考察,采用数字PCR对质粒分子进行定值,并对测量结果进行不确定度评定。结果表明,数字PCR测得pMs8的外源基因和内源基因的比值及其不确定度为1.12±0.13,k=2。     

转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞特异性杀伤淋巴瘤的体外实验

目的 探讨转基因树突状细胞激活细胞毒性T细胞产生抗淋巴瘤的特异性细胞免疫反应。方法 采用人骨髓来源的髓系前体细胞,在人细胞因子IL-4、GM-CSF和INF-α诱导下,在体外生成大量树突状细胞。将制备好的含有IgVH1核酸质粒,用脂质体法转染树突状细胞。转染成功的树突状细胞与外周血T淋巴细胞共培养,激活特异性CTL细胞,与阳性表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞反应,用3H-TdR掺入法观察CLLs对瘤细胞的特异性杀伤效应。结果 树突状细胞能够用脂质体方法转染IgVH1核酸质粒,并且有效递呈给外周血T细胞,对表达IgVH1的人淋巴瘤Namalwa细胞产生特异性免疫杀伤活性,与对照组相比差异有显著意义（P<0.01）。结论 体外诱导扩增的 DC能够转染 IgVH1核酸质粒,体外激活T淋巴细胞,产生特异性细胞毒效应。     

重组质粒pMG36e-nisI-gfp在乳酸菌中的应用

本研究将带有nisI和咖（绿色荧光蛋白）基因的乳酸菌表达载体pMG36e-nisI-gfp转化至乳酸菌中,观察其在宿主内的稳定性．对重组菌进行了菌体形态、传代培养、质粒验证等研究,考察了该质粒的稳定性．结果显示：重组菌在不含抗生素的培养基中连续传代20代后,质粒丢失率低;菌体大小和形态基本不变;质粒经HindⅢ酶切后大小不变;GFP在第0、5、10、15和20代宿主菌中都可以表达,表达量没有明显差别,在SDS-PAGE中的带型一致;初步的动物实验验证了该质粒作为遗传标记的应用效果．说明该质粒在宿主菌中具有良好的稳定性．     

载银纤维的抗耐药菌性能研究

通过对含有耐氨苄青霉素质粒的转化制备得到了耐药菌,并通过定性和定量试验,介绍了载银纤维的抗菌性能,并结合SEM结果分析了载银纤维的抗菌机理。结果表明该载银纤维对含有耐氨苄青霉素质粒的耐药菌有很好的抑制作用,甚至导致了细菌的膨胀破裂。     

细菌质粒DNA的快速提取及检测

介绍一种质粒DNA的快速提取方法,所分离出的DNA纯度较好,全部操作仅在两只Eppendorf管中进行,含质粒DNA的上清液可直接点样走琼脂糖凝胶电泳。整个提取过程在较短时间内完成。该方法简便、快捷、效果好。     

细菌质粒

1 前言Lederberg 和 Tatum 于1946年发现微生物不仅有无性繁殖(Asexual reproduc-tion),而且还能进行有性繁殖(Sexual reproduction),自此才开始较系统地研究细菌质粒(Bacterial plasmid)。人们对质粒研究的兴趣起始于细菌的抗药性。由于质粒所具有的独特性质,随着分子生物学的发展,使质粒研究成为分子生物学领域内异常活跃的研究对象。近年来,质粒做为基因工程研究工作中的一个重要的分子载体(Molecular Carrier),更受到国内外学者的普遍关注。1959年日本学者发现了抗药性质粒。V(?)vian 于1971年发     

核黄素操纵子在B．subtilis 24R7染色体上整合对核黄素合成的影响

构建含有B．subtilis 24核黄素操纵子的整合型核黄素质粒pRB40、pRB61和pRB63，研究了核黄素操纵子分剐在B．subtilis 24R7染色体的rib、amyE和thrC位点整合对核黄素合成的影响．结果表明，核黄素操纵子通过单交换重组方式整合在上述位点可使核黄素合成量增加14％～19％，而通过双交换重组方式整合在amyE或thrC位点可使核黄素合成量增加40％～44％．增强核黄索操纵子在B．subtilis 24R7染色体上的稳定性可以提高核黄素的合成量．     

蜂毒溶血肽(Melittin) cDNA的克隆及序列分析

为了克隆得到正确序列的蜂毒溶血肽cDNA，对蜂毒中的蜂毒溶血肽进行了研究。实验从蜜蜂毒腺中提取总RNA，通过RT－PCR方法扩增到了蜂毒溶血肽的cDNA，扩增产物克隆到pT7Blu-T载体，转化大肠杆菌JM109，DNA序列分析结果表明克隆得到的蜂毒溶血肽cDNA脱氧核糖核苷酸序列正确。     

pEgr-ssEndostatin的构建及其在体外的辐射诱导表达

为探讨pEgr-ssEndostatin重组质粒转染B16细胞后接受不同辐射剂量以及接受同一剂量不同时程endostatin表达的规律。采用RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出Endostatin cDNA,连入信号肽,构建了pEgr-ssEndostatin重组质粒,用脂质体介导的转染法转染小鼠B16细胞,用ELISA方法检测B16细胞上清中endostatin的表达水平。结果表明的分泌型Endostatin序列与报道完全一致,Egr-1启动子和Endostatin cDNA正确插入表达载体pcDNA3．1;pEfr-ssEndostatin具有辐射诱导表达特性。提示小鼠Endostatin基因成功地被克隆和表达,Egr-1启动子具有辐射激活和诱导下游基因表达增强的功能。     

两个重组质粒在快生型大豆根瘤菌中的稳定性的比较

将两个复制子相同的重组质粒导入快生型大豆根瘤菌中，考察了得到的转移接合子在培养和共生条件下的稳定性。发现带有质粒ＲＫ２ ｐａｒ基因的重组质粒ｐＴ２ＴＸ３Ｋ在快生型大豆根瘤菌中无论在培养还是共生条件下都可以稳定存在，而不带有该基因的重组质粒ｐＣＫ３在两种条件下都有一定程度的丢失。