Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus和Streptococcus thermophilus接种比例对Bifidobacterium lactis益生菌发酵乳品质的影响

将Lactobacillus delbrueckii subsp.bulgaricus ND02(LB-ND02)和Streptococcus thermophilus ND03(ST-ND03)按1∶1、1∶10、1∶100、1∶1000接种于脱脂乳中,同时接入益生菌Bifidobacterium lactis V9(B.lactis V9,接种量为2.0×107g-1),于42℃进行发酵。通过对发酵及贮藏过程中发酵乳指标的测定,评价LB-ND02和ST-ND03的接种比例对发酵乳品质的影响。结果表明,随着LB-ND02接种比例减小,凝乳时间显著延长,B.lactis V9活菌数显著提高。4℃贮藏28 d后,随LB-ND02接种比例减小,B.lactis V9存活率差异显著,后酸化也显著减弱。研究发现,LB-ND02和ST-ND03的接种比例,显著影响发酵乳的发酵时间、B.lactis V9活菌数、后酸化及黏度。     

保加利亚乳杆菌生长性能与后酸化的关系初探

以5株德氏乳杆菌保加利亚亚种为出发菌株,详细研究了5株菌的生长代谢、酸敏感性及蛋白水解力,并分析了这些特性与后酸化之间的关系。结果表明:5株菌的生长性能与后酸化之间存在紧密联系。其中,菌株的生长速度和糖分解代谢能力与后酸化成正比;对酸较敏感菌株的后酸化也较弱;菌株的蛋白水解能力与生长速度和后酸化之间没有明显的相关性。     

Phenanthrene Metabolites from a New Polycyclic Aromatic Hydrocarbon-Degrading Bacterium Aeromonas salmonicida subsp. Achromogenes Strain NY4

A new polycyclic aromatic hydrocarbon (PAH)-degrading Gram-negative bacterium Aeromonas salmonicida subsp. achromogenes strain NY4 was isolated from coking wastewater sludge. Strain NY4 could not grow on1-hydroxy-2-naphthoic acid, hexadecane or hexanol as sole carbon source but phenanthrene. This strain was able to utilize several known microbial metabolites of PAHs, including catechol, protocatechuic acid, salicylic acid, and phenol as sole carbon source. The mixture of the acidic and neutral fraction, acidic fraction alone and neutral fraction alone of phenanthrene metabolites were prepared and analyzed by GC-MS. A total of at least 27 metabolites were identified as the degradation products of phenanthrene by strain NY4. Among them, 1-hydroxy-α-oxo-2-naphthaleneacetic acid, 2-hydroxy-α-oxo-1-naphthaleneacetic acid, 2-hydroxy-1-(1-hydroxy-2-naphthalenyl)-ethanone, 1,2-dihydro naphtha [2,1-b] furan-2-ol and 2,3-dihydro naphtha [1,2-b] furan-2-ol have not been reported as the metabolites of phenanthrenes so far. The accumulation patterns of phenanthrene metabolite accumulation by strain NY4 depended on the incubation time, inoculum size and concentration of phenanthrene. Based on the degradation metabolites of phenanthrene by strain NY4, degradation pathways are proposed. This is the first report of PAH degradation in Aeromonas salmonicida, which lay the foundation for recognition and further characterization of PAH degradation metabolites and pathways in Aeromonas salmonicida strains.     

优良保加利亚乳杆菌菌株的筛选及增殖培养

以24株德氏乳杆菌保加利亚亚种菌株为材料,通过发酵特性分析,包括产酸、产粘、后酸化及发酵风味质地等感官特性,从中筛选出具有优良发酵特性的菌株L3,LB和M28.并对LB菌株的增殖培养基进行了初步探讨,为酸奶发酵剂的开发奠定一定基础.     

利用组成型表达载体pMG36e电转化德式乳杆菌保加利亚亚种的研究

以典型的乳酸菌组成型表达质粒pMG36e为载体,德式乳杆菌保加利亚亚种为受体.采用电转化方法研究受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电转化参数、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响,探讨电转化的最适条件,以提高电转化效率.结果表明:选择含2.5%甘氨酸的SMRS培养基培养受体细胞至对数中期,收获制成感受态细胞,在电场强度12 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF条件下电击转化,以含20 mmol/L MgCl2、CaCl2的SMRS培养基复苏培养2 h,涂板筛选得到较高的电转化效率.特别是采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率提高30倍以上,达到6.3×104cfu/μg DNA.本研究结果为进一步构建乳酸菌组成型高效表达系统和食品级基因工程乳酸菌株提供试验依据.     

对虾原肌球蛋白致敏小鼠模型的构建及乳酸菌肠黏膜免疫效应对致敏性的影响

以原肌球蛋白（tropomyosin,TM）为主要过敏原,腹腔注射6 周龄BALB/c雌、雄小鼠,从第14天开始给治疗组小鼠口服灌胃长双歧杆菌婴儿亚种（Bifidobacterium longum subsp.）1.2202或芽孢乳酸菌09.712（Bacillus coagulans 09.712）,连续灌胃20 d。根据小鼠腹泻情况、过敏症状评分、血清中组胺（histamine,HIS）质量浓度、TM特异性免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig）E水平变化构建TM致敏及益生菌治疗小鼠模型;通过氯乙酸萘酚酯酶染色、高碘酸希夫试剂特殊染色法检测各组小鼠肠道部位的肥大细胞和杯状细胞,通过免疫组化法检测各组小鼠肠道部位的CD4＋ T细胞和嗜酸性粒细胞;探究肠黏膜免疫在TM致敏及益生菌缓解TM致敏作用中的机理。结果表明：雌性小鼠更适用于构建TM致敏模型;益生菌灌胃可以通过降低血清中HIS质量浓度和IgE水平缓解肠黏膜免疫反应,减轻TM过敏症状。本研究从肠黏膜免疫反应角度探究了其在TM致敏中的作用,为食物过敏的研究提供参考。     

食品中椰毒假单胞菌酵米亚种实时荧光PCR检测的研究

目的建立食品中椰毒假单胞菌酵米面亚种实时荧光PCR检测方法。方法根据椰毒假单胞菌酵米面亚种16S～23S rRNA基因片段序列,用Oligo7设计一对特异性引物和一个TaqMan探针,摸索最佳退火温度,最佳引物和探针浓度,建立椰毒假单胞菌酵米面亚种实时荧光PCR检测方法。通过对唐菖蒲伯克霍尔德氏菌以及22种其他标准菌株进行实时荧光PCR检测,验证本法的特异性和抗干扰性。同时从菌液浓度和DNA浓度水平上进行研究,确定该检测方法的灵敏度。结果用该方法检测23种菌,除唐菖蒲伯克霍尔德氏菌外,其他22种细菌均为阴性。抗干扰性试验显示杂菌对检测结果不影响,本法抗干扰能力强。通过灵敏度试验的研究,确定本法检测椰毒假单胞菌酵米面亚种的菌液灵敏度为1×10~2 CFU/mL,DNA灵敏度为250 fg/μL。结论本试验设计的引物和探针具有较强特异性、抗干扰性以及灵敏度,该方法具有很好的研究价值和应用前景。     

海藻酸钠-微晶纤维素在SETR中包埋纳豆芽孢杆菌的固定化研究

目的 考察海藻酸钠-微晶纤维素在新型软弹式反应器(soft elastic tubular reactor, SETR)中对菌株的包埋作用。方法 使用海藻酸钠(sodium alginate, SA)与微晶纤维素(microcrystalline cellulose, MC)制成海藻酸钠-微晶纤维素水凝胶(microcrystalline cellulose/sodium alginate microcapsule, SA-MC)并包埋纳豆芽孢杆菌, 以光学显微镜形态、微球直径为指标, 单因素法优化SA与MC的配比和包埋时间; 并对优化好的SA-MC进行pH溶胀实验; 应用24 r/min的挤压频率进行发酵, 观察SA-MC在该过程中对pH的影响。结果 SA与MC以1:3的比例混合, 包埋时间1 h效果最佳; SA-MC对pH的响应并不敏感, 可用于发酵环境对菌株的包埋和保护; 与空白相比, SA-MC在SETR发酵环境中对pH有缓冲效果。结论 在SETR环境中SA-MC包埋纳豆芽孢杆菌表现较好的包埋作用。后续将进一步优化包埋材料的配方, 并对不同发酵参数的影响规律进行深入研究。本研究为天然材料包埋益生菌, 并旨在为SETR的应用推广提供理论支持。     

巨大芽孢杆菌L2发酵产物对魔芋软腐病菌的抑菌机制

目的：探究巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）L2发酵产物对贮藏期魔芋软腐病菌——胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora subsp. carotovora）EC-1的抑菌机制。方法：以巨大芽孢杆菌菌粉为原料提取发酵产物,用常压硅胶柱层析分离得到发酵产物流分LE4-1～LE4-7,经抑菌实验筛选得到对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用的流分,再使用气相色谱-质谱（gas chromatography-mass spectrometry,GC-MS）法对其进行成分分析;并通过测定其半数抑制质量浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）、菌液电导率、核酸蛋白泄漏、可溶性总糖质量浓度、菌体总蛋白、菌体磷代谢及胞内活性氧水平对其抑菌机制进行研究。结果：巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1有良好抑菌作用,经GC-MS检测其主要成分为苯乙酸乙酯（32.190%（相对含量,后同））、亚油酸乙酯（15.819%）、苯乙酸甲酯（13.793%）等;LE4-3对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1的IC50为（1.06±0.01）mg/mL,并初步推测其作用机制是通过影响细胞膜完整性、损伤细胞结构、抑制细胞蛋白质合成及能量代谢等对胡萝卜软腐欧文氏菌EC-1发挥抑菌作用,因此巨大芽孢杆菌L2流分LE4-3在魔芋抗软腐病贮藏中具有良好的应用前景。     

冷鲜调理肉三种乳酸菌发酵剂的筛选

为筛选出符合冷鲜调理肉制品发酵的优质乳酸菌发酵剂,对3株乳酸菌的发酵特性进行研究,通过耐盐、耐亚硝酸盐、产粘、产酸能力、蛋白质和脂肪分解能力、菌种间的拮抗作用等试验对其进行优势菌种筛选。结果表明,菌株LLSL、LP、LGG对食盐和亚硝酸盐具有较好的耐受性,能在6%的食盐溶液和150 mg/L亚硝酸盐溶液中存活,能有效产酸,无降解蛋白质和脂肪能力,不产气、不产氨、不产H2S;其中,菌株LLSL、LP不产粘,两者间无拮抗作用,可作为于冷鲜调理肉制品的发酵剂;菌株LGG产粘,影响冷鲜调理肉制品的感官品质和内部组织状态,不适合作为冷鲜调理肉制品的发酵剂。