同时检测恩诺沙星和环丙沙星单克隆抗体的制备

为了产生同时检测恩诺沙星和环丙沙星的抗体,本研究采用戊二醛法制备突出恩诺沙星和环丙沙星共同结构的人工抗原。免疫Balb/c 小鼠的结果显示：使用糖基化载体所制备的免疫抗原,能够大幅提高所产生特异性抗体的滴度。通过细胞融合,筛选出一株对恩诺沙星和环丙沙星IC50 值分别为9.6ng/mL 和10.2ng/mL 的单克隆抗体。     

液相色谱-四级杆/线性离子阱复合质谱法分析恩诺沙星在海参体内的代谢产物

为鉴定恩诺沙星给药后其在海参(Stichopus japonicas)体内的主要代谢产物,取药浴后均质的海参样品,经酸化乙腈提取、浓缩、正己烷净化后,利用液相色谱-四级杆/线性离子阱复合质谱法进行分析。采用电喷雾离子源在正离子模式下进行多反应选择监测结合实时触发增强子离子模式(MRM-IDA-EPI)扫描,分析恩诺沙星在海参体内的代谢产物。实验结果表明,给药6 h后海参体内共鉴定出10种恩诺沙星代谢产物,包括恩诺沙星异构化产物(M3)、脱乙基产物环丙沙星(M1)及其异构体(M2)、加氢还原产物及其异构体(M4、M5和M6)、羟基化恩诺沙星及其异构体(M7和M8)和加氧恩诺沙星及其异构体(M9和M10)。恩诺沙星在海参体内的代谢产物M2~M5以峰面积计,均高于环丙沙星(M1)。研究发现恩诺沙星在海参体内主要发生脱乙基反应和加氢还原反应,其主要代谢产物为M2和M4。     

恩诺沙星分子印迹聚合物膜的制备及吸附性能研究

采用表面印迹法,以恩诺沙星为模板,甲基丙烯酸(MAA)为功能单体,乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)为交联剂,在聚苯乙烯酶标板表面直接合成恩诺沙星分子印迹聚合物膜。通过傅立叶红外光谱分析、电镜扫描、吸附平衡结合实验、Scatchard方程分析及吸附动力学实验对恩诺沙星印迹聚合物膜进行性能表征。合成的分子印迹聚合物膜具有很好的印迹效果,对恩诺沙星有较高的特异性吸附,且传质速率快,由Scatchard方程分析可知,聚合物膜中含有两类吸附位点,其中高亲和力位点的平衡解离常数(Kd)为19.49μg/mL,饱和吸附容量(Qmax)为12.98μg/mL,低亲和力位点的Kd为277.78μg/mL,Qmax为98.14μg/mL,吸附位点的异质性并不会影响聚合物膜应用于竞争性免疫吸附分析。通过该方法合成的恩诺沙星特异性识别聚合物膜可以作为仿生抗体,应用于竞争性免疫吸附分析检测恩诺沙星在食品中的残留。     

超高效液相色谱质谱法测定水产品中恩诺沙星含量的不确定度评价

采用超高效液相色谱质谱法测定水产品中恩诺沙星的含量,分析不确定度的来源,建立评估的数学模型,通过计算不确定度的各主要分量,给出了测定结果的扩展不确定度.评定结果表明:影响检测结果不确定度的主要因素为标准溶液的配置、样品的回收率和测量重复性等.     

毛蚶蛋白对益生菌抗生素胁迫的保护作用

长期摄入抗生素残留的水产品可引起肠道菌群稳态失调。该研究基于恩诺沙星对四种益生菌（两歧双歧杆菌BBi32、鼠李糖乳杆菌LGG、植物乳杆菌LP45和乳双歧杆菌Probio-M8）的抑菌作用，建立了抗生素胁迫的益生菌生长模型，评价了红三鱼、黄蚬和毛蚶蛋白粗提物及其不同分离纯化组分对益生菌抗生素胁迫的保护作用。在四种益生菌中，乳双歧杆菌Probio-M8对抗生素胁迫最为敏感，三种原料中毛蚶蛋白粗提物表现出对抗生素胁迫保护作用；毛蚶蛋白粗提物经过阴离子交换柱（SepharoseFastFlow）分离得到四个组分（Fr0、Fr1、Fr2和Fr3），其分子量分别为14.3~44.3 ku（Fr0）、20.1~29.0 ku（Fr1）、14.3~97.2 ku（Fr2）和<14.3 ku（Fr3），其中Fr0可更有效地提高Probio-M8菌液的OD600从0.80提升至1.56，Fr3可将其生长代时缩短至0.98 h。毛蚶蛋白可促进乳双歧杆菌在恩诺沙星胁迫下增殖的活性，表明毛蚶蛋白具有保护益生菌免受抗生素生长胁迫、促进益生菌增殖的功能，该研究为毛蚶蛋白对肠道稳态的调节功能提供理论依据，并提出了应对体内抗生素残留的应对方案。     

恩诺沙星注射液在猪体内残留消除规律研究

目的研究恩诺沙星注射液在猪体内的残留消除规律。方法本实验采用30头约50 kg重长白猪,随机分为2组,给药组25头,对照组5头。给药组用药量为每次2.5mg恩诺沙星/kg,每日1次,连用3d(1个疗程),使用1个疗程,对照组不给任何抗菌药物,与给药组同环境饲养。在最后一次给药6 h、24 h(1 d)、72 h(3 d)、120 h(5 d)、168 h(7 d)时采集肉、肝、肾、脂肪样本,经液相色谱-串联质谱法(liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)测定组织中的恩诺沙星及其代谢物环丙沙星残留量之和,并利用WT1.4软件计算休药期。结果恩诺沙星注射液在猪肉中的休药期为3.17 d;在肾脏中的休药期为3.75 d;在肝脏中的休药期为8.18 d;在脂肪总的休药期为4.09 d。结论为保证兽药使用安全、食品安全和消费者健康,推荐恩诺沙星注射液在猪体内的休药期为9 d。     

高效液相色谱串联四极杆质谱法同时测定豆芽中7 种药物残留

为加强对豆芽类产品的监管,研究豆芽中7 种药物（6-苄基腺嘌呤、4-氯苯氧乙酸、2,4-D、赤霉素、多菌灵、腐霉利和恩诺沙星）同时检测的方法。该方法使用乙腈对豆芽中7 种药物进行同时提取,使用高效液相串联四极杆质谱仪对上述7 种药物进行检测。7 种药物在0.01～10 μg/mL（多菌灵和恩诺沙星在0.01～1 μg/mL）内线性良好（R2≥0.987）。两种豆芽中7 种药物的3 个添加量（分别为0.002、0.2、0.5 mg/kg）回收实验结果表明：7 种药物的回收率为60.31%～108.51%,相对标准偏差为1.03%～13.10%,方法检出限为0.010 5～0.125 μg/kg。     

水产品中恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测及其前处理

目的:结合胶体金标记技术和免疫层析技术建立胶体金免疫层析毛细管检测技术,用于水产品中恩诺沙星残留的快速现场检测。方法:以间接竞争的实验原理,通过优化检测区抗原、质控区二抗、金标一抗检测浓度初步建立胶体金免疫层析毛细管检测方法,并进一步确定其检测灵敏度、特异性、重复性等及前处理的优化操作。结果:该方法检测恩诺沙星的视觉检测限为5 ng/mL,半定量检测限为1.29 ng/mL。在大菱鲆、鲅鱼、舌鳎、南美白对虾阴性样品中的平均添加回收率在78.3%~129%之间,相对标准偏差均小于10%。特异性实验表明,除对环丙沙星外,对其他相似物的特异性较好;环丙沙星的视觉检测限为10 ng/mL,半定量检测限为4.37 ng/mL,满足国标检测的限量要求。同时,针对免疫层析毛细管检测的前处理方法进行初步探究,最终确定采用常温条件下磺基水杨酸提取的前处理方法。结论:恩诺沙星胶体金免疫层析毛细管检测技术具有简单、快速、易操作、重复性好的优势,为食品药物残留检测领域提供了检测新方法。同时,选择新型试剂作为胶体金免疫层析毛细管检测技术的前处理方法,该方法可以为多种快检技术的前处理提供理论基础与技术支撑。     

稳定同位素标记恩诺沙星-D5的合成

该文提出简便的、丰度不稀释的方法合成恩诺沙星-D5,即以乙醇-D6为合成前体,与碘反应得到碘乙烷-D5,再进一步与环丙沙星烷基化生成目标产物。以消耗的乙醇-D6计算,恩诺沙星-D5总收率为69.9%。产品结构经质谱和核磁共振波谱等表征确定,D的同位素丰度为99.6%,色谱纯度为99.0%,可作为食品安全领域检测用同位素内标试剂。     

活性炭对恩诺沙星吸附的热力学与动力学研究

从热力学和动力学角度,研究了活性炭对水溶液中恩诺沙星的吸附行为。热力学研究表明：活性炭对恩诺沙星的吸附符合Freundlieh等温吸附方程。测得△H=-16．02kJ·mol^-1,说明活性炭对恩诺沙星的吸附过程为放热过程,且IAHI〈20kJ·mol^-1,表明吸附过程为物理吸附。同时测得吉布斯自由能AG〈0,受温度影响不大,表明吸附质从溶液到吸附剂表面的吸附过程是自发过程。动力学研究表明：活性炭对恩诺沙星的吸附更好地符合伪二级动力学描述,测得其表观活化能眈为105．72kJ·mol^-1。