伤寒沙门氏菌特异性θ诊断血清的应用

应用新的特异性θ诊断血清和传统商品血清与434株伤寒沙门氏菌地方株作玻片凝集平行试验，两者诊断符合率为100％。θ血清与0．1％酚琼脂斜面上的所有伤寒沙门氏菌呈迅速清晰的阳性凝集反应。鉴于θ血清与大多数D群沙门氏菌不凝集，因此，大大提高诊断的正确性。     

肠道杆菌的扫描电镜观察

我们用扫描电镜观察肠道杆菌种(Enterobacteriaceae)中的四种细菌,大肠埃希氏杆菌(Escherichiacoli),普通变形杆菌(Proteus vulgaris),伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi)和福氏志贺氏菌(Shigella Flexneri)。未处理的菌落标本,菌落表面都可形成一层厚薄不同的表膜(Surface film)。四种细菌菌落的表膜,形状不一,千姿百态。适当处理后的菌落标本,则可显示菌体的本来面目。四种细菌菌体在菌落表面的分布和排列,也是各不相同,千差万别。本文根据扫描电镜的观察,对四种不同菌落进行了讨论。     

聚乙二醇化重组人生长激素的性质及活性

目的　研究聚乙二醇化重组人生长激素的性质及活性。方法　通过分子筛高效液相 (SizeexclusionHPLC)、毛细管等电聚焦 (CIEF)、圆二色谱 (CD)以及荧光光谱等方法检测单聚PEG- GH的纯度、等电点、二级结构以及分子构象 ;采用妊娠兔肝细胞放射受体分析法 (RRA)检测单聚PEG GH的体外受体亲和力 ,采用未成年去垂体大鼠体重增加法检测体内生物活性。结果　分子筛高效液相图谱上仅出现一个峰 ,表明样品纯度很高 ,等电点范围为 5 .1～ 5 .2 ,与未修饰的rhGH的等电点相一致 ;CD谱与荧光光谱均表明单个mPEG ALD的修饰对rhGH的二级结构以及分子构象没有明显影响 ;与未修饰的rhGH相比 ,单聚PEG GH体外受体亲和力明显降低 ;但体内作用时间更长 ,且更加有效。结论　此结果为进一步研究和开发长效重组人生长激素提供了理论依据。     

重组人EC-SOD包涵体的稀释复性及重折叠后蛋白的纯化

目的确定重组人ECSOD包涵体体外稀释复性和复性后蛋白纯化的适宜方法。方法通过对pH、温度、包涵体蛋白浓度、尿素和精氨酸浓度及氧化还原对比率的定性定量分析,研究重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的基本条件。采用金属离子亲和柱(IMAC)和肝素亲和柱(Heparinsepharose)对复性蛋白进行纯化,比较纯化效率的差异。结果最佳复性条件为pH8.5,尿素浓度为1.5molL,精氨酸浓度大于0.3molL,GSH∶GSSG=4∶1;复性温度及包涵体蛋白终浓度越高,复性效率越低。IMAC和Heparinsepharose亲和柱均可用来纯化复性蛋白溶液,但Heparinsepharose纯化效率较高。结论确定了重组人ECSOD包涵体体外稀释复性的最佳条件及复性后蛋白纯化的方法。     

重组人白细胞介素-10在大肠杆菌中的表达及生物学活性分析

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10),并检测其生物学活性。方法将IL-10基因重组到质粒pET11c中,转化BL21(DE),提取质粒,经酶切鉴定和测序分析;在25℃用低浓度的IPTG诱导表达,对包涵体IL-10稀释复性;经ELISA检测其含量,MC/9细胞增殖法检测其生物学活性。结果工程菌IL-10/pET11c/BL21诱导表达的目的蛋白以可溶性和包涵体两种形式存在,Westernblot鉴定证实为IL-10蛋白,两种形式的IL-10均具有一定的生物学活性。结论已成功地在大肠杆菌中表达了IL-10,为进一步纯化和制备IL-10的基因工程药物打下了基础。     

应用免疫策略对蒙脱石HIV DNA疫苗免疫作用的研究

目的运用Prime—Boost策略,研究蒙脱石(MMT)DAN疫苗对小鼠免疫功能的影响。方法选用3H-TdR掺入法测定MMT和DNA联合免疫小鼠脾淋巴细胞的增殖反应;采用ELISA试剂盒检测血清中的抗体和细胞因子。结果使用痘苗病毒和/或加入MMT加强免疫DNA疫苗后,均可以提高其体液和细胞免疫功能。结论“Prime-boost-boost”免疫方案在小动物模型中取得了较好的免疫效果。     

重组人干扰素α2b阴道泡腾片抗豚鼠单纯疱疹病毒性阴道炎的疗效

目的观察重组人干扰素α2b阴道泡腾片对单纯疱疹病毒性阴道炎动物模型的疗效。方法采用单纯疱疹病毒感染建立豚鼠实验性阴道炎模型,并分别用重组人干扰素α2b阴道泡腾片600、3 000和15 000 IU/只进行治疗。以阿昔洛韦(无环鸟苷)和干扰素α2b栓剂15 000 IU/只作为对照。对治疗前后豚鼠阴道外观及组织切片进行评分。结果应用重组人干扰素α2b阴道泡腾片对豚鼠实验性单纯疱疹病毒性阴道炎进行治疗后,豚鼠阴道外观病变与组织切片病变评分均显著降低,其中15 000 IU/只效果最好。同样剂量的α2b泡腾片药效优于栓剂。结论重组人干扰素α2b阴道泡腾片对实验性单纯疱疹病毒性阴道炎有明显的疗效。     

重组人干扰素α2b内毒素检查法的研究

目的研究鲎试剂法与家兔法检测重组人干扰素α2b内毒素结果的相关性,并参照家兔热原试验的阈值量,来确定本制品质量标准中内毒素的限量标准。方法分别用不同浓度的内毒素溶液和含不同浓度内毒素的供试品溶液进行家兔热原质试验,确定供试品内毒素限值,并在此限值下进行内毒素检测,方法均参照2000年版《中国药典》和2000年版《中国生物制品规程》进行。结果在含不同浓度内毒素溶液的家兔热原质试验中,致热阈值小于5.0EUml。在含不同浓度内毒素供试品溶液的家兔热原质试验中,致热阈值小于1.25EUml。以此确定本品内毒素限值,检测该制品的内毒素含量,结果均符合规定。结论本品在内毒素含量小于3.5EU500万单位dose的范围内,根据具体的对照实验及制品的用途来规定细菌内毒素限值,可用鲎试剂法代替家兔法检测注射用重组人干扰素α2b冻干制剂的热原质。     

脊髓灰质炎病毒与痘苗病毒重组体的构建及表达

含脊髓灰质炎病毒1型(简称 PV1)全基因7.4Kb cDNA 和编码 PV1外壳蛋白 VP12.5Kb 的 cDNA 片段的两株重组痘苗病毒(RV-1和 RV-2)表达了 PV1抗原。经荧光标记的抗 PV1型特异性单克隆抗体检测,感染了 RV-1和 RV-2的 Herp-2细胞呈阳性荧光反应。免疫印迹实验证实两株重组痘苗病毒分别表达 PV1抗原三条和两条特异性蛋白带。免疫家兔后能诱导产生抗 PV1中和抗体。本文对重组病毒表达 PV1抗原的效率进行了初步讨论。     

一个新的不耐热的伤寒沙门氏菌特异性抗原(θ)的发现

我们在研究伤寒沙门氏菌保护性抗原期间,发现了一个新的不耐热的伤寒沙门氏菌特异性抗原,暂时命名为θ抗原。这个抗原存在于各种类型的伤寒沙门氏菌中,并能从Ty2菌苗株细胞提取。以不吸收的抗θ兔血清作试管凝集时,与O90l和H901菌株的凝集效价分别为1:640和1:320。但与Ty2或9,12,Vi:d:-菌株不发生凝集,这一现象以后证实是由于Vi抗原的存在。θ抗原形成凝集较幔(31℃18～24小时),其所形成的凝集块疏松,易摇散、呈半絮状。菌体经100℃30分钟加热后与θ血清不发生凝集。玻片凝集试验显示θ血清与W和V型伤寒沙门氏菌(后者须培养在含酚培养基上)在1分钟内产生明显凝集。而与大多数D群(包括D_1和D_2)沙门氏菌和其他沙门氏菌不凝集,并与下列肠杆菌科细菌亦不凝集,包括志贺氏菌属A、B、C、D群,大肠艾希氏菌O:1～25和致病性大肠艾希氏菌12个不同的血清型,3株变形杆菌以及含有α抗原的Wakefield茵。化学分析显示,粗制θ提取物含有核酸(491μg/ml)。蛋白质(39μg/ml)和KDO(23μg/ml),但不含有O-乙酰基,表明θ抗原不同于Vi抗原。作者建议以θ血清替代现用的O:9,Vi和d因子血清作为伤寒沙门氏菌的血清学诊断。并需继续查明θ抗原的化学本质。