下游酪氨酸激酶7在肿瘤发生发展过程中的作用

长期以来下游酪氨酸激酶7(Downstream of tyrosine kinase 7,DOK7)一直被认为与先天性肌无力综合症(Congential myasthenic syndrome,CMS)息息相关,但是近些年的研究表明DOK7还与一些肿瘤表型有着密切的联系,有可能成为特定的肿瘤标志物,而目前在肿瘤领域中与DOK7相关的研究报道还比较少,值得对其进行深入探讨。本文整理了近几年来有关于DOK7与肿瘤发生发展的关联文献并加以总结,为后续研究提供可能的思路与肿瘤治疗策略,同时对DOK7基因的研究具有一定的现实指导意义。     

赤红球菌组氨酸激酶的融合表达和功能分析

对赤红球菌的组氨酸激酶基因进行密码子优化，将优化后的组氨酸激酶基因（rhks）构建重组表达质粒pGEX-4T-2-rhks。将此质粒导入到大肠杆菌BL21（DE3）中进行异源表达。在25 ℃和1 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷诱导条件下，组氨酸激酶融合蛋白（GST-RHK）获得成功表达，并具有催化活性。经谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化，获得电泳纯的GST-RHK，其中纯化倍数为3.1，得率为19.5%。该蛋白大小约为72.75 kDa，Km、Vmax和Kcat值分别为20.92 μmol/L、0.17 μmol/（L·min）和1.4 min－1。野生型赤红球菌、组氨酸激酶基因增强株sdrhkE和组氨酸激酶基因敲减株sdrhkD在分别含有苯酚、甲苯、氯苯、异辛烷4 种有机溶剂的培养基中培养，菌株sdrhkD的生长情况都优于野生型赤红球菌，菌株sdrhkE的生长情况都低于野生型赤红球菌。本研究为进一步揭示赤红球菌SD3中组氨酸激酶涉及的信号转导途径与赤红球菌有机溶剂耐受性的关联机制提供一定参考依据。     

兔小肠吸收纳豆激酶的免疫组织化学定位研究

目的研究口服纳豆激酶粗制液后,纳豆激酶(Nattokinase,NK溶栓酶)在小肠中的吸收定位情况.方法分离纯化得到电泳纯纳豆激酶,并经免疫得到兔抗纳豆激酶抗血清;实验日本大耳白兔随机分为正常对照组、口服大豆提取液对照组、口服纳豆激酶粗制液实验组,10周后剖杀动物并取十二指肠、空肠、回肠组织固定,分别作HE染色,并用链霉菌抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物法(Streptavidin-biotin-peroxi-dase complex method,SABC)进行免疫组织化学染色,各组均以PBS代替兔抗纳豆激酶抗血清作为替代对照,以正常兔血清代替兔抗纳豆激酶抗血清作为空白对照.结果HE染色结果表明,口服纳豆激酶不影响兔肠道的吸收功能;免疫组织化学检测结果表明,正常对照组与口服大豆提取液对照组各肠段未检出纳豆激酶免疫反应阳性部位,口服纳豆激酶粗制液实验组空肠纹状缘深棕色阳性吸收颗粒最多,且在上皮细胞胞浆中也有深棕色的阳性吸收颗粒,十二指肠与回肠纹状缘也有棕色、弥漫性的阳性吸收颗粒;各组的替代对照与空白对照均为免疫反应阴性.结论纳豆激酶可经口服被小肠吸收,空肠吸收效果最佳,回肠与十二指肠也都有吸收.     

一种来源于酵母Y.Lipolytica的新型蛋白质激酶——酪蛋白激酶…

培育了酵母菌种Ｙ．Ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ，并从中制取，纯化了一种蛋白质激酶－酪蛋白激酶Ⅱ。这种酶是一个四聚体α２β２，其分子量为１５８ｋＤ。     

黏着斑激酶生物信息学分析

从生物信息学的角度对黏着斑激酶进行分析,为进一步研究其高级结构及探寻黏着斑激酶的潜在功能提供理论数据.用生物信息学方法对已在GenBank上注册的人、牛、鸡、非洲蟾蜍、斑马鱼等动物黏着斑激酶基因的核苷酸序列以及推导的氨基酸序列、组成成分、氨基酸翻译后修饰、信号肽、跨膜拓朴结构域、疏水性/亲水性、蛋白质二级结构以及三级结构等进行分析预测和推断.结果表明:这些动物的黏着斑激酶属于非跨膜的亲水性蛋白,α-螺旋和不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,β-转角和延伸链散布在整个蛋白质中,包含三个结构域,即N末端FERM同源结构域,中部的激酶结构域和C末端富含脯氨酸的位点和FAT结构域.     

苯并吡喃酮类化合物与Skp2蛋白的分子识别及其抑制机理

S期激酶相关蛋白2(S-phase kinase-associated protein 2,Skp2)与Skp1形成的蛋白质聚合物在调控癌细胞生长周期中发挥着重要作用,而苯并吡喃酮类抑制剂(简称BPC)可有效抑制Skp1-Skp2的形成,但其分子识别机制尚不明确.通过生物信息学统计分析已报道的Skp1-Skp2晶体结构,确定模拟体系后,首先用同源模建对其模拟体系缺失的结构进行补全;然后用分子对接方法获得Skp1-Skp2-BPC复合物模型并用于后续分子动力学模拟.计算结果表明:疏水相互作用是促使BPC特异性结合在由Skp2 W109、D110、L117、I120、R138和W139所构成口袋中的主要驱动力,自由能计算值与实验数据吻合较好.Skp2结合BPC后,结合口袋周围的氢键网络有所加强,口袋附近的溶剂化水分子数量明显减少,导致Skp1-Skp2的体系稳定性下降.体系构象成簇与运动性分析显示,Skp1-Skp2在结合BPC抑制剂后,Skp1的运动更加剧烈,这可能是BPC主要的抑制机理.     

菰黑粉菌菌丝形成相关基因UeSsk2的克隆及表达分析

基于菰黑粉菌全基因组测序结果及其酵母型和菌丝型转录组差异化表达数据库,结合RACE技术克隆获得一个长度为7 625 bp的基因,其中编码序列为5 874 bp,无内含子.结构及聚类分析结果表明该基因编码的MAPKKK蛋白激酶,属于Hog1信号途径,与大麦坚黑粉菌中的Ssk2亲缘关系最近.表达分析结果显示:Ue Ssk2在菌丝诱导形成过程中持续上调表达,而在生长受到抑制的菌丝细胞中其表达无显著变化或受到抑制,表明Ue Ssk2与菌丝形成具有相关性.同时,经生物传感器进行的蛋白互作检测结果表明,Ue Ssk2与前期发现的Ue Mkk1不存在蛋白互作关系,表明该蛋白参与其他MAPK途径来影响菌丝形成及生长.     

磷酸化蛋白质分析

蛋白质的磷酸化过程是人体内翻译后修饰的重要一步,非正常的磷酸化会导致人体产生各种疾病.近年来,通过分析化学的手段研究磷酸化的过程取得了很大的进展.该文就蛋白激酶分析、磷酸化多肽的富集方面的国内外的研究进展进行了综述.     

作用于酪氨酸激酶的抗肿瘤小分子抑制剂γ-氟代Goniothalamin类似物的设计与合成

蛋白酪氨酸激酶在肿瘤细胞的增殖、分化、转移、侵蚀等信号通路中具有重要的调控功能,已成为肿瘤靶向治疗的重点研究对象。基于靶点导向原则和构效关系研究基础,以抗肿瘤活性天然产物Goniothalamin为母体化合物,修饰合成了一系列γ,γ-二氟取代Goniothalamin类似物（4a-4i,6a-6i）和γ-单氟取代Goniothalamin类似物（7a,7b,7h）。γ,γ-二氟取代的Goniothalamin类似物可从具有光学活性的二氟亚甲基取代的锡试剂出发,经Stille偶联和1,5-氧化关环两步关键反应合成。γ-单氟取代Goniothalamin类似物则经Sharpless不对称环氧化、环氧开环亲核氟化、Lindlar氢化、HWE反应和1,5-氧化关环等反应制备。对所合成的这两类Goniothalamin含氟类似物进行了体外肿瘤细胞抑制活性和酪氨酸激酶抑制活性评估研究,结果表明在Goniothalamin分子的γ位引入一个氟原子进行修饰是较为合理的修饰方式。     

猪血清磷酸肌酸激酶活力与其耐热和耐粗饲性能关系的研究

以体重２０ｋｇ辽宁本地黑猪的血清磷酸肌酸激酶（ＣＰＫ）活力为依据，筛选出２４头大约克夏猪，分为高酶和低酶两组，设夏季凉爽环境、自然环境、高温环境、自然环境粗饲４种处理。低酶组表现出较强的耐热性和耐粗饲性，日增重较高，且以体重３０ｋｇ和６０ｋｇ的血清ＣＰＫ活力时生长性状相关明显。