高表达PGA的枯草芽孢杆菌蛋白质组学研究

为了解外源蛋白高表达时枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)表达系统胞内蛋白质组的变化,实验建立了青霉素G酰化酶(Penicillin G Acylase,PGA)高表达B.subtilis系统,可达到1.6 g/L的表达量以及10 U/mL的酶活;通过双向电泳技术(2-DE)分离PGA高表达以及低表达重组菌中胞内蛋白,软件分析结果显示,两者胞内蛋白表达差异极大;通过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定出其中6个差异蛋白,其中4个与PGA高表达抑制菌体生长相关,而PhoR和YxiE则与PGA高表达分泌胁迫机制有关.     

蚯蚓蛋白质组双向电泳技术体系的建立及条件优化

对赤子爱胜蚓(Eisenia fetida)表皮组织的两种蛋白质提取方法进行了比较,并对双向电泳IPG胶条pH范围,上样量条件进行了优化,结果表明:裂解液提取法提取的蛋白质量浓度较低,蛋白种类缺失,采用TCA-丙酮沉淀法提取法,可显著提高提取液蛋白质提取效果,样品中蛋白质质量浓度可达12.49μg/μL.蚯蚓表皮组织蛋白质主要分布在pH范围4～7之间,适于选用24cmpH 4～7线性梯度IPG胶条,采用考马斯亮蓝染色法时最适上样量为600μg,所得电泳图谱可检测蛋白点达(629±20)个,且重复性实验匹配率较高.用TCA-丙酮沉淀法提取蚯蚓表皮组织蛋白质组,按优化的参数进行双向电泳分离,所得图谱分辨率高、重复性好,可用于蚯蚓蛋白质组学研究.     

急性放射损伤小鼠血清蛋白质组分析

为寻找急性放射病早期诊断指标和新的治疗靶点，探讨辐射损伤的发病机理，采用蛋白质组学的双向电泳和蛋白质氨基酸序列分析技术研究了8Gy γ射线照射后24h小鼠血清蛋白质的变化，鉴定有差异的蛋白质，并用蛋白质印迹(Western blotting)方法进行验证。结果显示，双向电泳发现8Gy照射后24h小鼠血清有一显著变化蛋白点，分子量约为15ku，经氨基酸序列分析发现为结合珠蛋白(Haptoglobin，Hp)的α亚单位。Western blotting方法进一步验证了双向电泳的结果。结果表明，经8Gy γ射线照射后24h小鼠血清中结合珠蛋白发生显著增加，可能在辐射损伤中发挥着一定的作用，此结果为探索急性放射损伤的发病机理提供了新的线索。     

双向电泳在畜牧业和渔业中的最新应用

总结了近年来双向电泳在畜牧业和渔业中的研究进展，着重于该技术在遗传繁殖、品种识别，相关疾病微生物及各种胁迫对动物产生的影响等方面的应用。     

HPLC-Chip/Ms纳流液质联用鉴定神经源性休克死亡心肌组织差异蛋白

目的：采用比较蛋白质组学方法分析正常与神经源性休克死亡蛋白表达差异。方法：外力打击兔颈动脉窦建立神经源性休克死亡模型,提取死亡组与对照组左心室肌蛋白进行二维电泳和凝胶图像分析,对差异蛋白质用HPLC-Chip/Ms纳流液质联用技术进行序列分析,经Spectrum Mill搜索UniProtKB/SWISS-PORT后鉴定蛋白质。结果：筛选出3个神经源性休克死亡组表达上调的蛋白质：封闭蛋白1、过氧化物酶增殖物激活受体δ、角蛋白15,1个表达下调的蛋白质甲基转移酶4。结论：神经源性休克发生了心肌蛋白表达改变,鉴定出的4种蛋白是潜在的神经源性休克生物标记物,可成为神经源性休克死亡诊断的客观依据。     

基于特征点的凝胶图像配准方法研究简

本文针对几种凝胶图像配准算法进行了比较研究,在此基础上,对基于SURF（speeded up robust features快速鲁棒特征提取的配准算法）配准算法进行了改进,一方面,在提取特征点时对Hessian矩阵行列式进行加权,从而获得更多特征点;另一方面,在特征点匹配时应用欧式距离加权处理作为相似度量来计算两特征向量的距离,提高了算法的性能和配准速度。     

蛋白组学及其在食品科学研究中的应用

后基因组时代的主要研究任务之一即是蛋白组学研究,蛋白组学技术发展迅速,目前已有望成为用来解决生命科学领域中诸多问题包括食品品质与安全等食品科学问题的有力工具。蛋白组学为食品科学相关研究提供了新的思路和技术,在食品科学研究中已有广泛的应用。介绍了蛋白质组学研究的核心技术,即蛋白质组分分离、蛋白质组分鉴定、利用蛋白质组信息学进行结构和功能预测,综述了蛋白组学技术在食品科学研究中的进展,并展望了其应用前景。     

瓶装黄酒蛋白组成分析及其主要成分的分离纯化

为了研究瓶装黄酒中的蛋白组成,并纯化其主要成分;采用双向电泳(two-dimensional electrophoresis,2-DE)及基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)分析瓶装黄酒的蛋白组成,并纯化α-淀粉酶抑制剂0. 19;瓶装绍兴黄酒中蛋白主要包括来源于小麦的α-淀粉酶抑制剂0. 19、类燕麦蛋白和病程相关蛋白,以及来源于大米种子的过敏蛋白RAG2和α-淀粉酶/胰蛋白酶抑制剂RA16,纯化后的α-淀粉酶抑制剂0. 19经SDS-PAGE检测,得到一条分子质量大小为13. 7 k Da的蛋白条带;瓶装黄酒中只含有小麦和大米蛋白,且α-淀粉酶抑制剂0. 19的蛋白点数量最多,是瓶装绍兴黄酒蛋白的主要成分,研究蛋白的结构特点及其对黄酒浑浊形成的影响可为解决浑浊问题提供理论依据。     

干酪乳杆菌蛋白质双向电泳条件优化及图谱建立

采用超声波法和液氮研磨法提取了干酪乳杆菌菌体蛋白质,通过固相pH梯度等电聚焦双向电泳对蛋白质进行分离,并分别利用硝酸银和考马斯亮蓝方法进行染色.对上述不同方法比较结果显示,超声-三氯乙酸/丙酮提取蛋白质方法简便易行,适用于快速制备蛋白质样品,液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法更适合干酪乳杆菌大规模蛋白质提取及组学检测,并且在制备的过程中不发生明显的蛋白质降解的现象.利用液氮研磨-三氯乙酸/丙酮沉淀法制备的干酪乳杆菌蛋白质样品分离效果良好,可获得重复性好和高分辨率的双向电泳图谱,便于后续的质谱及差异蛋白质组的分析,值得同行及相关研究者参考和借鉴.     

白鲢鱼肌原纤维蛋白双向电泳分析体系的建立

以白鲢鱼为研究对象,建立并优化其肌原纤维蛋白的双向电泳技术。结果表明,选用固相p H值梯度预制胶条p H 4~7,上样量120μg,等电聚焦程序Ⅲ(50 V主动水化15 h,250 V、2 h,1 000 V、2.5 h及4 000 V、3 h三段式除盐,8 000 V、2 h和10 000 V、1.5 h两段式升压,10 000 V聚焦80 000 V·h,500 V保持10 h)以及12%的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分离胶条件下进行双向电泳,凝胶银染后用PDQuest软件分析,得到具有高分离度的肌原纤维蛋白双向电泳图谱,蛋白点清晰。