电镜在巨核细胞性白血病诊断中的应用

巨核母细胞及不成熟幼稚巨核细胞性白血病,单靠一般形态学分析,难以鉴别本病的病理细胞,必须结合电镜细胞化学及特异性抗体免疫标记综合判断明确诊断。标本采自5例巨核细胞性白血病患者的周围血及骨髓穿刺,同时分别做一般超微结构观察,血小板过氧化物酶(PPO)反应,髓过氧化物酶(MPO)反应及抗血小板糖蛋白单抗(CD_(41)、CD_(42))免疫金标记。电镜下5例病人白血病细胞的共同超微结构特征有(1)细胞大小不一,少数幼稚型细胞,比原粒,原红,原     

28例急性巨核细胞白血病实验室检查结果分析

目的:分析急性巨核细胞白血病(AMKL)患者实验室检查特点。方法:4管用8色抗体组合对28例AMKL患者的骨髓有核细胞进行免疫表型分析,同时结合分析患者骨髓细胞形态学、融合基因和染色体核型等检查结果。结果:28例AMKL患者中阳性表达率较高的是巨核细胞相关抗体:CD41a、CD61、CD42b、CD36,阳性率分别为81. 48%、92. 86%、72. 00%、70. 83%,其中,CD41a、CD61、CD42b三种抗体共表达的患者占53. 57%,至少表达两种抗体的患者占82. 14%。髓系祖细胞相关标志:CD117、CD34、CD38、HLA-DR阳性表达率分别为64. 29%、42. 86%、64. 29%和46. 15%,与非APL的AML患者相比表达率均较低(P <0.01);髓系全程抗原CD13、CD33在AMKL中阳性表达率与非APL的AML之间无统计学差异。髓系中后期抗原CD15及单核系抗原CD64、CD14、CD300e和胞浆抗原MPO、cCD79a和cCD3均阴性。与非Down综合征相关AMKL(non-DS-AMKL)相比,CD7与CD11b的表达在Down综合征相关AMKL(DS-AMKL)中较高(P <0.05)。AMKL患者中17例(65.4%)为复杂染色体核型,5例为+21染色体异常;仅5例患者核型正常。25例行白血病融合基因筛查,24例(96%)患者WT1基因表达增高(40.24±59.14%),12例患者(70.58%) EVI1基因表达增高(53.93±37.98%),4例患者融合基因阳性(2例MLL-AF9阳性,1例TLS-ERG,1例P210 BCL/ABL)。结论:AMKL中82.14%患者表达至少两种巨核细胞相关标志,髓系祖细胞标志表达相对较低,多为复杂染色体核型异常,WT1及EVI1异常表达率较高。     

脾多肽注射液对治疗原发性血小板减少症的作用途径研究

目的：探索脾多肽注射液（LPI）对原发性血小板减少症（ITP）模型小鼠血小板生成的影响。方法：用随机数表法将实验用SPF级昆明小鼠进行分组,小鼠隔天腹腔注射兔抗鼠血小板血清（APS）诱导构建小鼠ITP模型。在设定时间通过尾静脉方式采血,检测各组血小板、红细胞、白细胞的数量变化,同时计算胸腺、脾脏指数,通过骨髓涂片的方式对巨核细胞进行分类并计数,最后用ELISA法检测血清中促血小板生成素（TPO）、干细胞因子（SCF）、白介素-3（IL-3）、白介素-6（IL-6）、白介素-11（IL-11）、β-血小板球蛋白（β-TG）、转化生长因子-β1（TGF-β1）、血小板因子-4（PF-4）表达水平。结果：LPI可显著提高ITP模型小鼠血小板计数水平,对红细胞、白细胞无影响;胸腺、脾脏指数显著下降;小鼠骨髓中的原始巨核细胞、产血小板巨核细胞数升高,幼稚型巨核细胞、颗粒型巨核细胞和裸核型巨核细胞数均无显著变化;血清中细胞因子SCF、IL-3、IL-6显著升高,PF-4显著降低。 结论：LPI可能通过上调IL-3、IL-6、SCF水平和下调PF-4水平来提高ITP小鼠的血小板数量,对LPI的临床推广应用具有指导意义。     

阿糖胞苷诱发小鼠血小板减少模型的研究

目的: 建立阿糖胞苷诱发时间更快和更稳定的小鼠血小板减少模型。方法: 小鼠腹腔分别注射200 和100mg°kg^-1 阿糖胞苷, 造成血小板减少, 观察两组动物外周血象 、骨髓涂片和脾脏、肾上腺、胸腺重量的变化。结果: 两种剂量的阿糖胞苷都能成功造成小鼠血小板减少模型, 在诱发时间和稳定性方面200 mg°kg^-1 阿糖胞苷组优于 100 mg°kg^-1 阿糖胞苷组, 除血小板数之外,两剂量组的其它观察指标无明显区别。结论: 200 mg°kg^-1 阿糖胞苷组造成的小鼠血小板减少模型诱发时间更快、稳定性更好。     

巨核细胞图像分割方法的研究

随着现代医学研究的飞速发展,显微图像定量分析已经广泛应用到临床诊断、病理分析、癌变分级分类等越来越多的医学领域之内。巨核细胞是骨髓切片图像中个体较大的细胞,形状不规则,对其进行有效提取和分割对骨髓成份统计分析、血液疾病诊断等都有重要意义。该文根据数学形态学的知识,利用直方图势函数提取标记点,并将这些标记点作为种子点来对梯度图进行Watershed变换,进而实现骨髓切片中巨核细胞的有效分割。该方法是一种谱信息与空间信息相结合的分割方法,对分割结果与传统算法的对比分析表明,改进后的算法在分割的完整性和一致性上具有更好的效果。     

促血小板生成药物治疗特发性血小板减少性紫癜26例临床疗效观察

目的:观察促血小板生成药物治疗巨核细胞不增多的特发性血小板减少性紫癜(ITP)近期疗效。方法:选取巨核细胞不增多的特发性血小板减少性紫癜患者26例,分别给予单用甲强龙、白介素11(IL-11)、血小板生成素(TPO)以及IL-11联用TPO方案治疗。结果:甲强龙组有效率16.7%,IL-11组37.5%,TPO组33.3%,联用组66.7%,使用促血小板生成药物各组血小板升高更迅速,计数更高。结论:IL-11与TPO治疗巨核细胞不增多的ITP疗效优于甲强龙,联合应用疗效更好且安全性高。     

矢车菊素-3-葡萄糖苷对人巨核细胞株Dami增殖分化的影响

目的：研究植物花色苷单体矢车菊素-3-葡萄糖苷（cyanidin-3-O-β-glucoside,Cy-3-g）对人巨核细胞株Dami的增殖、分化作用。方法：不同浓度的花色苷Cy-3-g（0.05、0.50、5.00、50.00、100.00 mmol/L）与人巨核细胞株Dami细胞共同培养,并将用完全培养基培养的细胞设为对照组。培养结束后,用台盼蓝染色法检测巨核细胞活性、噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）染色法检测细胞增殖能力,软琼脂细胞集落培养法观察巨核细胞集落生成情况。采用Giemsa染色法观察细胞形态、流式细胞术检测巨核细胞DNA多倍体的生成及细胞表面CD41阳性表达率。结果：与对照组相比,50.00、100.00 mmol/L的Cy-3-g可增强Dami细胞活性,差异具有统计学意义（P＜0.05）;各Cy-3-g剂量组与对照组相比,均可明显增强Dami细胞增殖能力（P＜0.01）;Dami细胞集落数目、DNA多倍体数目以及CD41的阳性表达率在50.00、100.00 mmol/L Cy-3-g作用下明显升高,且与对照组相比均具有统计学差异（P＜0.01）。结论：Cy-3-g能够明显促进人巨核细胞株Dami的增殖、分化,这可以为花色苷促进血小板生成提供可能的理论依据。     

人体c-Mpl分子配体蛋白XP1的表达、纯化及活性初步鉴定

TPO是近年发现的血小板生成素，它通过与其受体c-Mpl的结合刺激巨核细胞的发生，调节动物或人体血小板的生成。利用酵母双杂交系统，以人体c-Mpl受体作为诱饵蛋白，我们从人体肝脏cDNA文库筛选到另一与c-Mpl相结合的新配体，命名为XP1。将：xpl-cDNA构建到pET-28b大肠杆菌融合表达载体，经金属离子亲和层析柱和DEAE阴离子层析柱分离纯化，获得纯度为99％的His-XPI水溶性融合蛋白。表达产物利用小鼠巨核细胞集落形成单位测定活性。结果表明：xpl基因在大肠杆菌中获得高效水溶性表达；其产物对小鼠骨髓细胞巨核细胞集落形成单位有明显的刺激作用。     

慢性特发性血小板减少性紫癜发病机制的探讨

目的探讨巨核细胞负调控因子PF4和TGF-β1在CITP患者血浆中的变化,为难治性CITP的发病及治疗提供有价值的依据。方法用ELISA试剂盒检测待测血浆中PF4和TGF-β1水平,用光学显微镜分类计数标准化骨髓涂片巨核细胞。结果CITP未正规治疗组及复发难治组外周血浆中PF4和TGF-β1水平显著高于正常对照组(P<0.05);缓解组治疗后PF4和TGF-β1水平较治疗前显著下降(P<0.05),接近正常对照组;未缓解组治疗前后无明显变化(P>0.05);CITP患者治疗前骨髓涂片均以颗粒巨核细胞为主伴产板障碍;治疗后缓解组患者骨髓涂片以产板巨核细胞为主。结论巨核细胞负向调控因子如PF4及TGF-β1可能参与CITP的发病。     

TPO对MO7e细胞的作用探究

目的了解Thrombopoietin(TPO)对人原巨核细胞白血病细胞株MO7e细胞的影响,间接了解TPO使用剂量和时机与血小板动力学的关系。方法MTT法测定MO7e细胞的计数,得出TPO浓度—MO7e细胞增值曲线,倒置显微镜下观察MO7e细胞的计数和形态。结果TPO可提高MO7e细胞增值,当TPO浓度为256ng/ml时细胞计数达到最高,加入TPO48h后MO7e细胞计数达到最高。结论TPO可促进MO7e细胞增值,TPO最佳的用药剂量和用药时机是256ng/ml和48h。