动物组织中新霉素残留量的测定

本文就ＨＰＬＣ法对动物组织中新霉素残留量的测定进行了阐述。     

进口转基因抗Basta^TM除草剂油菜籽检测方法研究

建立了从油菜籽中提取总DNA和用PCR技术检测外源基因的方法,用该方法从进口油菜籽中检出外源的草丁膦乙酰转移酶基因（PAT）、新霉素磷酸转移酶基因（NptII)、花椰菜花叶病毒35S启动子（CaMV35S)。     

米根霉F1-ATPase活性降低突变株的筛选研究

本实验采用同步辐射软X射线Nk诱变米根霉,获得一株新霉素抗性突变株NA-2,该菌株F1-ATPase活性降低86.82%,胞内ATP含量下降18.99%,最终菌体浓度为出发菌株的79.22%,发酵周期缩短了12h,葡萄糖平均消耗速度和L-乳酸生产强度分别高出25.17%和32.57%,平均葡萄糖消耗比速(qs)、L-乳酸生成比速(qp)和细胞比生长速率(μ)分别提高86.42%、128.13%和60.0%,但胞内能荷变化不明显。进一步研究发现,突变株糖酵解途径中关键酶磷酸果糖激酶(PEK)、丙酮酸激酶(PK)和磷酸甘油醛激酶(GAPDH)的活性较原始菌株提高了58.34%、23.53%和11.29%,乙醇脱氢酶(ADH)活性降低了32.11%,乳酸脱氢酶(LDH)活性提高了42.27%。结果表明,降低米根霉F1-ATPase活性有效地提高了糖酵解关键酶活性而加速葡萄糖代谢,提高了L-乳酸生产强度。     

弗氏链霉菌产硫酸新霉素高通量选育模型的建立及优化

建立基于多孔板发酵及酶标仪检测的高通量选育模型,提高诱变后硫酸新霉素高产菌株的筛选效率。对影响酶标仪检测的主要影响因素1.0×10~(-4)mol/L曲利本蓝的添加量(μL/m L)进行优化,并建立相应的分光光度法,对适用高通量筛选模型的微孔板进行选择,并对其发酵条件进行正交优化。结果表明,曲利本蓝的添加量为500μL/m L,硫酸新霉素在1.284～10.272 U/m L,吸光度与样品浓度呈良好的线性关系(R~2=0.998 8),平均回收率为98.468 4%,重复性RSD为3.270 0%;24孔板适用于高通量筛选模型,优化后发酵条件:转速、装液量和接种量分别为220 r/min、2 m L和8%,在此基础上,实际发酵效价达到(6 825±77)U/m L,较原发酵条件提高了27.40%。基于多孔板发酵及酶标仪检测建立高通量选育模型,能够达到诱变后快速筛选硫酸新霉素高产菌株的目的,也为后续高通量选育其他抗生素高产菌株奠定了基础。     

新霉素酶联免疫检测方法的研究——新霉素抗体的制备

以碳化二亚胺作为偶联剂,分别将新霉素(Neomycin,NEO)和牛血清白蛋白(Bovine serum albu-min,BSA)、血蓝蛋白(Keyhole limpet hemocyanin,KLH)进行偶联,得到偶联产物BSA-NEO和KLH-NEO。对BSA、KLH、NEO及其偶联产物BSA-NEO、KLH-NEO进行红外光谱分析,结果显示偶联产物的红外光谱中同时存在载体蛋白和NEO的特征吸收峰,初步证明偶联成功;将偶联产物BSA-NEO和KLH-NEO作为新霉素免疫抗原,分别免疫新西兰大白兔,成功获取新霉素抗血清,间接ELISA法测得抗血清效价可达1.28×105以上。     

硫酸新霉素废水活性污泥的微生物群落结构解析

对硫酸新霉素废水处理中的好氧、厌氧活性污泥进行16S V3-V4扩增区域的微生物分类测序,采用宏基因组技术解析活性污泥的微生物群落结构.结果表明,从门水平而言,好氧活性污泥中的微生物主要为相对丰度为34.3％的变形菌门和相对丰度为11.5％ 的拟杆菌门,厌氧活性污泥中的微生物主要为相对丰度为42.7％ 的厚壁菌门、相对...     

新霉素的直接竞争酶联免疫分析法

首先用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白-卵清白蛋白(ovalbumin,OVA),合成包被原OVA-NEO,SDS-PAGE 进行鉴定;用高碘酸钠法连接辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP),制备酶标抗原NEO-HRP并建立直接ELISA检测方法。通过一系列参数的优化,包括包被溶液、封闭溶液、竞争时间、抗体稀释液、pH值、反应温度、显色时间等,最终得到其IC20(抑制率为20%时的标准溶液质量浓度)＜1ng/mL、半数抑制量(IC50)为7.6ng/mL,线性方程为y =－0.2798x＋0.7456,R2=0.991。直接ELISA总耗时只需大约1h。     

生物强化技术在硫酸新霉素制药废水中的应用

为了提高硫酸新霉素制药企业废水生化系统抗冲击力,增强对难降解有机物的降解能力,降低废水生物毒性,在模拟生化系统水解池、好氧池及缺氧池中分别投加生物解毒剂和生物菌剂,对各反应池进水、出水水质COD浓度及去除率、NH₃-N浓度及去除率、发光细菌的发光强度等进行了监测。经过17天的试验,结果表明：在进水水质波动较大的情况下,投加生物药剂的模拟生化系统出水COD浓度稳定在700～800 mg/L、NH₃-N浓度稳定在10 mg/L以下,且波动较小,抗冲击能力强于空白组;COD去除率提高至76.1%～82.5%,NH₃-N去除率达到97.5%以上。同时,实验组投加生物药剂后,废水中的生物毒性对发光细菌的抑制率比空白组低,实验组活性污泥微生物的生长不仅没有受到抑制,反而还有促进作用。     

常压室温等离子体诱变选育抗后酸化的乳酸菌

为降低酸奶在运输及储藏期间的后酸化,采用常压室温等离子体(atmospheric and room temperature plasma, ARTP)和新霉素诱变筛选,通过致死率曲线与阳性筛选率曲线确定最佳处理条件为ARTP处理30 s,新霉素筛选质量浓度为300 mg/mL,该条件下共获得7株生长特性良好,具有较低H⁺-ATP酶活性的副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)突变株。通过全脂牛乳发酵,突变菌株BJT-7在20 d储藏期间酸度维持在70°T以下,遗传稳定性良好。结果表明,ARTP是一种高效诱变方法,结合新霉素筛选可得到抗后酸化能力强的乳酸菌株。     

年产3.0万十亿单位硫酸新霉素发酵车间工艺流程设计

硫酸新霉素是一种氨基糖苷类抗生素药物,对葡萄球菌、克雷伯菌属、变形杆菌属等肠杆菌科细菌有良好抗菌作用。硫酸新霉素的制备由发酵、粗提和精制三个部分组成。发酵工段主要有接种和一次发酵、二次发酵,发酵液进入粗提工段,经过阳离子树脂吸附、过筛、反洗、解吸以及阴离子树脂交换得粗提液,最后进入精制工段经过转盐、过滤、干燥得到产品。介绍年产3.0万十亿单位硫酸新霉素的发酵车间工艺设计,内容包括:产品概述、流程设计及叙述、"三废"处理及综合利用等。