无抗性选择标记的植酸酶基因转化DNA的构建

构建了无抗性选择标记植酸酶基因的转化片段DNAphyAⅡ。两侧设置了高等植物基因组DNA保守序列CAATbox，TATAbox和polyA的DNA片段（DNAphyAⅡ，5‘-CAATbox-TATAbox-CaMV35S-phyA Ⅱ-GUS-Nos-Tem-polyA-3‘)，为提高转化率奠定了分子基础，此外DNAphyAⅡ中植酸酶蛋白编码基因phyA Ⅱ前后的启动子和终止子序列，确保了phyA Ⅱ会得以正确表达。     

黑曲霉植酸酶的纯化及性质研究

对黑曲霉液态发酵植酸酶的纯化及其性质进行了初步探讨．采用葡聚糖凝胶过滤及纤维素离子交换层析对粗酶液进行纯化，电泳显示为单一谱带，该酶的相对分子质量为63000，研究显示其性质为：37℃的条件下以植酸钠为底物的米氏常数为0．31mmol／L，该酶最适pH为5．5，最适作用温度为55℃，研究了金属离子对植酸酶活力的影响．     

克鲁斯假丝酵母植酸酶对植物性饲料中植酸的脱磷作用

在植物性饲料中,磷主要以植酸磷的形式存在,不能被单胃动物有效利用。在饲料中添加植酸酶,水解植酸脱磷,可以提高动物对磷的利用率。本文通过正交试验,确定了克鲁斯假丝酵母(CandidaKrusei)WZ 001植酸酶水解豆粕和麸皮中植酸脱磷的最适作用条件;并模拟动物胃肠pH环境,对克鲁斯假丝酵母WZ 001植酸酶和2种与其酶活相同的商品酶降解饲料中的植酸脱磷的能力进行了比较。结果表明:WZ 001植酸酶水解饲料植酸10h时释放的无机磷量是原游离磷的4.89倍,植酸水解率为67%,均高于酶活相同的2种商品酶。     

植酸酶对不同原料发酵乙醇的影响

本文考察以不同原料为底物时,在液化前添加植酸酶对液化粘度、DE值及后续发酵的影响。结果显示,当以全玉米粉为发酵底物,配料浓度为30%,植酸酶加量为10U·g-1干基时,液化及发酵效果最好,乙醇浓度可达15.38%(V/V),残糖指标相对也较低。使用全粉为原料时添加植酸酶对酒分提高显著。     

新型酶制剂在酒精生产中的应用

针对酒精发酵原料中的半纤维素、植酸和发酵过程中酵母产生的海藻糖,山东隆科特酶制剂有限公司推出了超耐热植酸酶、超耐热木聚糖酶、海藻糖酶三款酶制剂。对这三款产品的性质及其在酒精生产中的应用方法和效果作了介绍。超耐热植酸酶在液化工序添加,能够水解植酸,释放出玉米原料中的肌醇、无机磷、金属离子等,有利于：淀粉、蛋白的分离和酶解、促进酵母的生长代谢、提高出酒率、缩短发酵周期、提高DDGS的营养价值。针对小麦原料的酒精生产中工艺中,超耐热木聚糖酶能够显著降低液化醪粘度、改善液化效果、提高小麦掺混比例、减少发酵泡沫、提高出酒率、缩短发酵周期。在酒精发酵过程中添加海藻糖酶可以将发酵过程中产生的海藻糖水解为葡萄糖,供酵母利用,提高出酒率。     

植酸酶的激光诱变改性与分离纯化

植酸酶产生菌———黑曲霉(Aspergillus niger)可在不同的辐照条件下进行激光诱变,确定了适宜的诱变条件,即输出波长为1.06μm的Nd:YAG高重复率声光调Q激光,辐照频率4 kHz,功率10 W,水平照射2~2.5m in,并建立了变异菌株基因库。通过高通量筛选,从中筛选到一株酶学性质比较符合工业生产要求的变异菌株phy226,pH=2~3的第二酶活峰提高了40%,酶活温度稳定在30~60℃。发酵液经盐析、透析、凝胶层析和离子交换层析等分离纯化过程,最终纯化倍数达7.8,收率为25.2%。     

植酸酶毕赤酵母基因工程菌发酵条件的优化

对植酸酶毕赤酵母基因工程菌的营养条件和发酵条件进行研究.结果表明,其最佳培养基配方为(g/100 mL):葡萄糖5.00,玉米浆3.00,KCl 0.05,MnSO4·7H2O 0.03,FeSO4·7H2O 0.03,MgSO4·7H2O 0.07,KH2PO4 0.02;其最佳培养条件为:发酵初始pH 6.0,发酵温度31℃,用250 mL三角瓶,装液量为40 mL,菌体的接种量为10%(v:v),发酵周期60 h.在最佳发酵条件下,植酸酶活力提高3.57倍,高达5 462 u/mL.     

土壤中高产植酸酶芽孢杆菌菌株的筛选及鉴定

目的:从土壤中筛选高产植酸酶的芽孢杆菌菌株并作鉴定。方法:利用植酸酶能够水解植酸钙产生水解圈的特点,将样品处理后涂布于含有植酸钙的琼脂平板上,37℃培养3～4 d;挑取产生较大水解圈的菌落,再次划线分离,得单菌落,测定各菌株产植酸酶的活力;选取植酸酶活力最高的菌株,结合菌落形态、生理生化特征和分子生物学方法对其进行鉴定。结果:筛选到1株高产植酸酶的菌株,命名为ZJ0902,其酶活可达8 251U/mL。通过鉴定,该菌株为芽孢杆菌属中的Bacillus nealsonii。结论:该菌株的获得为植酸酶的产业化应用奠定了良好的基础。     

酶切方式对工程菌植酸酶性质的影响

将无花果曲霉（A.ficuum)AS3.324的植酸酶基因（phyA)，克隆到pPIC9K中，得到重组载体pPIC9K/phyA Ⅱ，分别用限制性内切酶Dra I和Bpul 102 I线性化，用电穿孔转化方法导入宿主巴斯德毕赤酵母（Pichia pastoris)GS115中，构建了两种植酸酶工程酵母。本文比较了这两种工程菌表达的植酸酶的酶学性质。研究结果表明，两者的酶学性质无显著差异。