“小浦东”秦历

认识秦历是在2002年夏。一位朋友请我去陕西南路淮海中路口的“家隆美食”吃饭，除了冷菜、热菜都适口之外，一款“雅片鱼头菌菇汤”使口味为之一振。雅片鱼即牙鲆鱼，头大而鲜，肉也多，但多为清蒸或加剁椒蒸。他却用来和当时还比较新奇的菌菇一起“笃”，烫、鲜一步到位。     

饲料中亮氨酸和异亮氨酸交互作用对牙鲆消化酶及免疫相关酶活力的影响

为研究饲料中亮氨酸(Leucine,Leu)和异亮氨酸(Isoleucine,Ile)的交互作用对牙鲆Paralichthys olivaceus肠道消化酶及肝脏免疫相关酶活力的影响,以含50%全鱼蛋白牙鲆幼鱼饲料中氨基酸组成为参考,设2个Leu水平(分别占饲料干物质的2.58%和5.08%),并将其分别与3个Ile水平(分别占饲料干物质的1.44%、2.21%和4.44%)交互制成6种试验饲料(LL-LI、LL-MI、LL-HI、HL-LI、HL-MI、HLHI);以初始体质量为(2.69±0.04)g的牙鲆为研究对象,将其随机分为6个组,每个处理组设3个重复,分别投喂含不同Leu和Ile水平的上述6种试验饲料;60 d的流水养殖试验结束后,测定牙鲆肠道消化酶(蛋白酶和脂肪酶)及肝脏免疫相关酶(总抗氧化能力T-AOC、过氧化氢酶CAT、超氧化物歧化酶SOD、酸性磷酸酶ACP、碱性磷酸酶AKP)活力。结果表明:高Ile饲料组肠道消化酶活力显著高于中间水平Ile饲料组(P<0.05),且饲料中高水平的Leu可降低肠道消化酶活力(LI组除外);在低Leu处理组,当Ile≥2.21%时,随着饲料中Ile含量的增加,肝脏中CAT、SOD、ACP和AKP活力显著提高(P<0.05);但在高Leu处理组,当Ile≥2.21%时,CAT、SOD和AKP活力随饲料中Ile水平的升高显著降低(P<0.05)。研究表明,Leu和Ile间存在交互作用,并显著影响牙鲆肠道消化酶及部分肝脏免疫相关酶活力,且在低Leu(2.58%)水平与高Ile(4.44%)水平(LL-HI饲料组)交互作用下,牙鲆肠道消化酶及肝脏免疫相关酶活力均为最高。     

利用发光细菌进行褐牙鲆中氯霉素残留快速检测的研究

从青岛近海分离鉴定出1株鳆发光杆菌(Photobacterium leiognathi)YL,发光性质及其发光规律曲线的测定表明,鳆发光杆菌发光规律稳定,持续发光时间长,发光强度大。各种抗生素的抑菌圈试验得出,鳆发光杆菌YL对氨零素最敏感。在浓度0～1.0μg/L,氯霉素的浓度与鳆发光杆菌的抑制发光率有良好的线性关系。采用乙酸乙酯提取氯霉素的方法可以有效降低它族抗生素的干扰。褐牙鲆加标回收试验中,鳆发光杆菌检测氯霉素残留的方法检出限为0.14μg/kg。     

牙鲆淋巴囊肿病的诊断技术研究

使用本实验室设计的PCR引物，在标记反应体系下，通过PCR反应合成了碱基数为172bp的牙鲆（Paralichthys olivaceus）囊肿病（Lymphocysits disease,LCD）的地高辛标记探针，在其琼脂糖凝胶电泳图172bp处有明显的亮带，由软件分析得出，合成探针的浓度为500ng/μl，此结果证明，该产物确是所需的探针，且具有很好的合成效率。通过实验证明本文采用的核酸探针-杂交诊断方法可以有效地定性和定位LCDV。实验结果还提示。LCDV是通过血液在牙鲆体内传播的，并可能同时存在垂直和水平两种传播方式。     

双单倍体牙鲆的性腺发生、性别分化及早期发育的研究

本文利用组织切片的方法研究了双单倍体牙鲆的性腺发生、性别分化及早期发育。结果显示:双单倍体牙鲆中除雌性外,还有雄性和未分化鱼出现,所占比例分别为56%、38%和6%。双单倍体牙鲆雌性的性别分化晚于普通牙鲆。雌鱼至100日龄,卵巢腔仍未闭合;110日龄雌鱼的产卵板上存在大量向卵母过渡的卵原细胞,未见Ⅰ时相卵母细胞出现。双单倍体牙鲆雄鱼精巢的分化在时间上和普通牙鲆的基本相同。随着发育的进行,双单倍体牙鲆雌鱼的卵巢出现部分异常的卵母细胞以及卵巢退化现象;部分雄鱼的精巢也有退化现象出现。9～11月龄,双单倍体牙鲆雄鱼的精巢发育到Ⅲ期,而普通牙鲆性腺在同期进入了Ⅳ期;11月龄开始双单倍体牙鲆雄鱼精巢有退化的迹象;13～15月龄,精巢退化成精小叶,其中只含有精原细胞,初级精母细胞消失不见,似Ⅱ期精巢。     

灭活病毒诱导牙鲆传代细胞差减cDNA文库的构建及分析

以灭活大鳞鲆弹状病毒诱导的牙鲆(Paralichthys olivaceus)传代细胞作为检测子(tester),正常对照细胞作为驱赶子(driver),分别提取mRNA,逆转录合成双链cDNA。经两轮差减杂交,两轮抑制性PCR扩增后,取正向差减的PCR产物与T载体连接,构建抑制差减cDNA文库,随机挑取7400余个克隆,对其中4200多个克隆进行PCR扩增鉴定,发现近4000个克隆中均含有插入片段,大小在250～1000bps之间,进一步对含有插入片段的近4000个克隆进行了斑点杂交筛选,得到近668个可能含有抗病毒或与免疫相关的阳性克隆。初步的结果表明所建立的差减cDNA文库适合进一步克隆鱼类抗病毒相关新基因。     

抗牙鲆淋巴囊肿病毒单克隆抗体的制备

用本实验室分离纯化的淋巴囊肿病毒(Lymphosystis Disease Virus China,LCDVcn)作为抗原,感染BALB／c小鼠,取被免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2／0融合;ELISA法检测、筛选阳性克隆,经过3次克隆化,首次成功获得18株抗牙鲆淋巴囊肿病毒的单克隆抗体。     

液相色谱串联质谱检测牙鲆鱼中的小清蛋白过敏原

以合成肽段ALTDAETK为定量特征肽段,SDFIEEDELK及LFLQNFAFSASAR为定性肽段,建立牙鲆中小清蛋白高效液相色谱-串联质谱的检测方法。同时对蛋白提取液、碘代乙酰胺浓度、酶/蛋白质比例、酶解时间在内的前处理条件和肽段质谱参数条件进行了优化。结果显示,ALTDAETK肽段在0. 005～10 mg/L线性关系良好(R2 0. 999),小清蛋白定量限2. 74 mg/kg;以大菱鲆为空白基质,重组小清蛋白的平均回收率为95%～102%,相对标准偏差(RSD)小于7%,重复性好。该文首次实现了用HPLC-MS/MS方法精确定量检测牙鲆中主要过敏原PV。     

鳗弧菌减毒活疫苗对牙鲆免疫效果的研究

目的研究鳗弧菌减毒活疫苗对牙鲆的免疫保护作用。方法以鳗弧菌野生菌全细胞灭活疫苗为对照,用肌内注射和浸泡免疫方式分析鳗弧菌减毒活疫苗对牙鲆的免疫保护作用。结果不同疫苗和免疫方式的受免鱼各免疫指标均有明显变化,以注射减毒活疫苗组最高,注射灭活疫苗组次之,浸泡组最低;人工攻毒实验表明,注射或浸泡减毒活疫苗的受免鱼免疫保护率达到100％,明显高于灭活疫苗的60％,同时对溶藻弧菌有一定的交叉免疫保护作用,最高免疫保护率可达60％。结论鳗弧菌减毒活疫苗可有效引起牙鲆的免疫应答。     

牙鲆连续三代减数分裂雌核发育家系的遗传特征分析

通过对连续两代减数分裂雌核发育牙鲆(Paralichthys olivaceus)再度诱导减数分裂雌核发育,首次获得三个连续三代减数分裂雌核发育二倍体家系(Meio-G3-1,Meio-G3-2,Meio-G3-3)。选用重组率高、中、低的30对微卫星引物,分析该三个家系的遗传构成。30个微卫星位点在三个家系中扩增到的等位基因数分别为35、38、37,平均等位基因数为1.17、1.27、1.23,平均观测杂合度(Ho)分别为0.1467、0.2556、0.2056,平均纯合度分别为0.853 3、0.744 4、0.794 4。三个家系内个体间的平均遗传相似度为0.991 3、0.991 8、0.983 8,母本与子代之间的平均遗传相似度为0.994 6、0.996 8、0.992 3,三个家系间的遗传相似度分别为0.971 7(Meio-G3-1和Meio-G3-2)、0.981 0(Meio-G3-1和Meio-G3-3)、0.971 4(Meio-G3-2和Meio-G3-3)。结果表明,连续三代诱导雌核发育能进一步提高个体的纯合度、个体间以及家系间的平均遗传相似度,是快速建立鱼类近交系的良好方法。